Protein-protein etkileşimlerini tespit etmek için biyotinile hücreye nüfuz eden peptit probu

Hücrelerde proteinler, yapılarındaki belirli diziler aracılığıyla etkileşen proteinlerine bağlanır - hücre içi protein işleyişini modüle eder.

Hücre içi protein etkileşimlerini tespit etmek için, yapışık bir hücre kültürü alın. Ortamı aspire edin.

Biyotinile hücreye nüfuz eden bir peptit, BCPP çözeltisi ekleyin ve inkübe edin.

Her BCPP, hedeflenen hücre içi proteine spesifik bağlanmaya yardımcı olan bir peptit dizisi içerir. Peptit, peptitin N-terminalinde hücreye nüfuz eden bir peptit olan CPP'ye ve kolay tespit için C-terminalinde biyotine sahiptir.

İnkübasyon sırasında, pozitif yüklü CPP bölgesi, hücre zarından bağlı peptit girişini kolaylaştırarak sitoplazmaya ulaşır. Peptit, hücre içi etkileşimli protein ortağına bağlanır ve bir BCPP hedef protein kompleksi oluşturur.

Hücrenin zarını parçalayan ve BCPP hedef protein komplekslerini ve diğer hücresel bileşenleri serbest bırakan deterjan molekülleri içeren bir tampon ekleyin.

BCPP'lerdeki biyotine spesifik olarak bağlanan bir glikoprotein olan agaroz boncuk bağlı avidin çözeltisi ekleyin. İnkübe edin, avidinin biyotine geri dönüşümsüz bağlanmasına izin verin ve avidin-BCPP hedef protein komplekslerini saflaştırın.

Boncukları pele