Protein Homo-Oligomerizasyonunu İncelemek için Floresan Dalgalanma Spektroskopisi

Floresan dalgalanma spektroskopisi, bir numunedeki proteinlerin oligomerizasyon durumunu belirleyebilir.

Başlamak için, floresan etiketli bir protein monomer çözeltisi içeren odacıklı bir slayt alın. Slaytı konfokal bir mikroskop altına yerleştirin. Protein monomerlerini uyarmak için lazer ışınını numunenin küçük bir kısmına (konfokal hacim) odaklayın.

Protein molekülleri, Brown hareketi nedeniyle konfokal hacmin içine ve dışına yayılır. Bu hareket, floresan yoğunluğunda hızlı değişikliklere neden olarak zamanla floresan yoğunluğunda dalgalanmalara yol açar.

İki protein monomerinin bağlanmasına ve böylece bir dimer oluşturmasına yardımcı olan iki değerlikli bir ligand olan dimerize edici ajanı ekleyin. Dimerizasyon nedeniyle, iki floresan etiket tek bir parçacık oluşturmak için bir araya gelir, bu da parçacık başına floresan yoğunluğunu artırır - moleküler parlaklık.

Dimerizasyona bağlı moleküler parlaklıktaki artış, floresan dalgalanmalarının genliğini arttırır - iki floresan etiket konfokal hacme birlikte girip çıktıkça.

Dimerize edici ajanı eklemeden önce ve sonra zaman boyunca konfokal hacmin görüntülerini elde edin.

Konfokal görüntülerdeki tek tek piksellerin parlaklığını hesa