JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 8:15 dk. • July 8th, 2025
Dallanmış bir glikoz polimeri olan glikojen, insan iskelet kası içindeki hücre altı intermiyofibriller, intramiyofibriller ve subsarkolemmal bölmelerde bir enerji rezervidir.
Transmisyon elektron mikroskobu, TEM kullanarak hücre altı glikojen dağılımını ölçmek için izole edilmiş insan iskelet kası dokusu elde edin. Doku yapısını korumak için glutaraldehit ile sabitleyin. Dokuyu bir osmiyum tetroksit ve potasyum ferrosiyanür çözeltisi içinde sabitleyin.
İndirgenmiş osmiyum-ferrosiyanür kompleksi, glikojendeki hidroksil gruplarına bağlanarak glikojen partiküllerinin kastaki kontrastını iyileştirir. Ek olarak, zarlar ve zara bağlı bir organel olan sarkoplazmik retikulum lekelenir.
Dokuyu artan etanol konsantrasyonlarında kurutun. Katı bir blok oluşturarak reçineye gömün. Uzunlamasına yönlendirilmiş kas lifleri ile ultra ince kesitler elde edin; TEM ızgaralarına aktarın.
Izgaraları uranil asetat, ağır metal çözeltisine daldırın. Uranil iyonları negatif yüklü lipitlere ve proteinlere bağlanarak onları elektron yoğun hale getirir. Kurşun sitrat çözeltisi ile lekeleyin.
Kurşun iyonları, glikojen parçacıkları da dahil olmak üzere osmiyum lekeli bölgelere bağlanarak kontrastı arttırır. Ayrı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin