DNA Çift İplikli Kırılmaların Analizi için İmmünofloresan Mikroskobu

DNA çift sarmallı kopmada spesifik DNA hasar yanıt proteinlerini görselleştirmek için, immünofloresan mikroskobu kullanan DSB bölgeleri, DSB'li insan mononükleer hücre tek katmanlarını içeren mikroskop slaytları ile başlar. Hücreleri paraformaldehit ile sabitleyin.

Hücre içi hedeflere erişmek için iyonik olmayan bir deterjan, geçirgen zarlar ile muamele edin. Hücrelerin spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke eden protein içeren bir bloke edici çözelti ekleyin. Hedef yanıt proteinlerine bağlanan birincil antikorlarla inkübe edin.

Proteinlere bağlı ilgili birincil antikorlarına spesifik olarak bağlanmak için farklı floroforlarla etiketlenmiş ikincil bir antikor karışımı ile tedavi edin. DNA'yı DAPI ile boyayın. Montaj ortamı ekleyin; lamel monte edin.

Floresan mikroskobu sırasında, gelen ışık huzmesi uyarma filtresine ulaşır ve belirli bir uyarma dalga boyundaki ışığın geçmesine izin verir. Dikroik aynaya - bir ışın ayırıcı - ulaştıktan sonra, uyarma ışığı seçici olarak objektif merceğe doğru yansır ve bu da ışığı numuneye odaklar.

Gelen uyarma ışığı, floroforun elektronlarını daha yüksek bir enerji durumuna uyarır. Temel duruma döndüklerinde, elektronlar daha uzun bir dalga boy