JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:47 dk. • July 8th, 2025
Bir proteindeki çoklu fosforilasyonlar, proteine çeşitli pozisyonlarda, özellikle serin ve treonin kalıntılarında fosfat gruplarının eklenmesini içerir.
Bir proteindeki çoklu fosforilasyonları tanımlamak için, amid hidrojenleri proteindeki diğer hidrojenlerden ayırt etmeye yardımcı olan nitrojen-15 ile etiketlenmiş fosforile proteinler içeren bir tüp ile başlayın.
Bağıl rezonans frekanslarının doğru ölçümü için dahili bir NMR referans bileşiği ekleyin. Karışımı bir nükleer manyetik rezonans veya NMR tüpüne aktarın. Tüpü dönen bir açıklığa yerleştirin ve bir NMR spektrometresine yerleştirin.
Fosfatların varlığı, fosforile serin ve treonin kalıntılarında elektron çekme etkileri gösterir. Sonuç olarak, fosforile kalıntıların amid hidrojenleri, diğer amid hidrojenlerine kıyasla daha düşük elektron yoğunlukları ile deshielded gibi görünmektedir.
Değişen elektronik ortamlara sahip amid hidrojenler, çekirdeklerin etrafında diferansiyel manyetik alanlar yaşar ve düşük enerjili durumlara ulaşır.
Hidrojen çekirdeklerini, elektronik ortamlarına bağlı olarak belirli bir rezonans frekansında daha yüksek bir enerji durumuna uyarmak için kısa bir radyofrekans darbesi uygulayın.
Gevşeme sırasında
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin