DNA-Protein Etkileşimlerini İncelemek için Dairesel Dikroizm Spektroskopisi Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:38 dk. • July 8th, 2025
ATP'ye bağımlı kromatin yeniden şekillenme proteinleri, DNA konformasyonunu ATP'ye bağımlı bir şekilde değiştirerek sıkıca paketlenmiş kromatinde gen ekspresyonunu düzenler.
Dairesel dikroizm veya CD spektroskopisi kullanarak kromatin yeniden modelleyici-DNA etkileşimlerini incelemek için, çift sarmallı DNA oligonükleotidlerinin bir çözeltisini alın. Oligonükleotidleri denatüre etmek için ısıtın ve buzun üzerine yerleştirin.
Hızlı soğutma, ikincil yapılar oluştururken DNA'nın yeniden doğasına neden olur. Çift ila tek iplikli geçiş bölgesi, kromatin yeniden modelleyicileri için optimum bir bağlanma bölgesi sağlar.
Isıyla soğutulmuş DNA'yı bir küvete ekleyin. ATP'ye bağımlı kromatin yeniden şekillendirici, ATP ve magnezyum iyonları içeren bir tampon ekleyin.
Yeniden şekillendirici DNA'ya bağlanır, ardından magnezyum iyonu kompleksli ATP'nin proteine bağlanması ve onu aktive etmesi gelir. Aktive edilmiş yeniden şekillendirici, ATP'yi hidrolize eder - DNA'da bir kök döngü konformasyonunu indükler.
Numuneden sol ve sağ dairesel polarize ışığı - 90 ° faz farkıyla - geçirin. Optik olarak kiral DNA, sol ve sağ dairesel polarize ışığı farklı derecelerde emer.
Dairesel dikroizm olarak adland
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin