Mikroglia'nın Fare Yavrusu Beyinlerinden Manyetik İzolasyonu

Mikroglia - beyinde yerleşik makrofajlar - bir hücre yüzeyi integrini olan CD11b'yi eksprese eder.

Mikroglia'yı fare yavrusu beyinlerinden izole etmek için, papain, bir proteolitik enzim ve deoksiribonükleaz ile tampon içeren ayrışma tüplerinde beyin parçaları alın.

Tüpleri mekanik bir ayrıştırıcı üzerine yerleştirin. Çalışma sırasında, ayrışıcı dokuyu mekanik olarak bozar.

Papain, dokunun hücre dışı matrisini sindirir ve mikroglia da dahil olmak üzere hücreleri süspansiyona bırakır. Deoksiribonükleaz, süspansiyondaki serbest DNA'yı parçalayarak verimsiz hücre izolasyonunu önler.

merkezkaç. Pipetleme ile mekanik ayrışmayı tamamlayın. Kalıntıları ve hücre kümelerini çıkarmak için süspansiyonu bir hücre süzgecinden geçirin ve homojen bir tek hücre popülasyonu elde edin.

Anti-CD11b antikorları ile işlevselleştirilmiş süperparamanyetik mikro boncuklarla inkübe edin. Mikro boncuklar, mikroglia da dahil olmak üzere hücreler üzerindeki CD11b'ye spesifik olarak bağlanır.

Kuluçka sonrası, santrifüj. Bağlanmamış boncuklar içeren süpernatanı çıkarın. Tampondaki hücreleri yeniden askıya alın. Manyetik bir ayırıcı üzerine yerleştirilmiş bir sütuna yükleyin. Sütun, ferromanyetik boncuklu bir mat