JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 3:37 dk • July 8th, 2025
Kısıtlanmış bir yetişkin fare ile başlayın ve karnını sterilize edin. Sağ alt karın bölgesine intraperitoneal olarak ekzojen bir demir kaynağı enjekte edin ve çevredeki organların kazara hasar görmesini önleyin.
Enjekte edilen demir kaynağı sistemik dolaşıma girer ve meningokok replikasyonu için yeterli demir sağlamak üzere farklı organlara gider.
Beyin omurilik sıvısı içindeki belirli bir bölge olan cisterna magna'ya, beyni çevreleyen meninkslerin orta ve iç katmanları arasındaki BOS dolu subaraknoid boşluğa daha kolay erişim için anestezi uygulanmış fareyi yüzüstü pozisyonda tutun, vertebral kolon düz tutun.
Farenin kafasını sterilize edin. Gram negatif patojenik bir bakteri olan Neisseria meningitidis veya meningokok'un bir süspansiyonunu, oksipital bir çapak deliğinden BOS dolgulu cisterna magna'ya enjekte edin.
Enjeksiyondan birkaç saat sonra, meningokoklar BOS'ta çoğalır ve verimsiz konak savunma mekanizmalarına sahip olan subaraknoid boşluğu işgal eder.
Bakteriler, meninkslerin katmanlarını kaplayan hücrelerle etkileşime girer. Bu etkileşim inflamatuar bir yanıtı tetikler; Hücreler proinflamatuar sitokinler salgılar ve bağışıklık hücreleri işe alınır, bu da meningeal iltihaplanma veya menenjite yol açar.
Sonunda, meningoklar sistemik dolaşıma da girebilir ve diğer organları kolonize edebilir.
Deneye başlamadan önce hayvanları tartın ve vücut sıcaklıklarını değerlendirin. Hayvanı boynundan aşağıya doğru fırçalayın ve karnı% 70 etanol ile dezenfekte edin. Enfeksiyondan yaklaşık iki ila üç saat önce, 25 gauge bir iğne kullanarak, karnın sağ alt kadranına intraperitoneal olarak demir dekstran enjekte edin.
Hayvanı uyuşturduktan sonra, ayak parmağını sıkıştırdıktan sonra ağrı tepkisi olmadığını doğrulayarak anestezi derinliğini kontrol edin. Fareyi laminer akış kabinine yerleştirdikten sonra, sternal dekübitusa yerleştirin ve vertebral kolonu düz bir pozisyonda tutmak için servikal omurgadaki uzuvları dikkatlice gerin.
Tutarlı bir bakteri süspansiyonu sağlamak için, 8 milimetrelik, 30 gauge bir iğne ile bir şırıngaya yüklemeden önce hafifçe karıştırın. Kafayı% 70 etanol ile dezenfekte edin. Hayvanı yanal yaslanacak şekilde yerleştirin, kulakları yoldan uzak tutun ve boynu orta derecede esnetin.
Boynun orta hattının ve başın masa üstüne mükemmel bir şekilde paralel konumda olduğundan emin olun. Ardından, üst üste bindiklerinden emin olarak atlas kanatlarına dokunun ve iğnenin oksipital deliğe girme olasılığının en yüksek olduğu orta hattaki doğal girintiyi hissedin.
Bir şırıngayı 8 milimetre, 30 gauge iğne ile toplam 10 mikrolitre hacminde kontrol olarak belirlenmiş alt öldürücü bakteriyel Meningokok dozu veya demir dekstran takviyeli GC suyu ile doldurun. Enjeksiyon noktasını belirlemek için iğneyi kullanın ve ardından şırınganın içeriğini oksipital bir Çapak deliğinden farelerin cisterna magna'sına enjekte edin.
Enjeksiyondan sonra şırıngayı ve iğneyi güvenli bir şekilde atın. Hayvanı laminer akış kabininin altındaki kafese yerleştirin. Uyanma ve hareketin tam olarak iyileşmesini bekleyin ve protokolde açıklandığı gibi enfekte hayvanlar üzerinde hayvanın hayatta kalması için devam edin.
Bu makale, yetişkin farelerde beyin omurilik sıvısına Neisseria meningitidis enjekte edilerek menenjit indükleme yöntemini özetlemektedir. Protokol, hayvan refahını ve deneysel doğruluğu sağlamak için sterilizasyonun ve uygun anestezik tekniklerin önemini vurgulamaktadır.
Güvenilir enfeksiyöz hastalık modellerinin oluşturulması, antimikrobiyal geliştirme süreçlerinde preklinik hedef doğrulaması ve mekanistik risk azaltma çalışmaları için kritik öneme sahiptir. Bu intrasisternal uygulama yöntemi, meningokok patogenezinin ve konak-patojen etkileşimlerinin hastalıkla ilişkili bir sistemde kantitatif olarak değerlendirilmesine olanak tanır. Model, öncü bileşiklerin belirlenmesi için tekrarlanabilir inflamatuar sonuçlar ve terapötik adaylara yönelik öngörücü güven sağlayarak erken keşif iş akışlarını destekler.
Bu yöntem, antimikrobiyal mekanizmaların hipotez testlerini mümkün kılarak ve lider optimizasyonu için kantitatif MSS enfeksiyon metrikleri sağlayarak, erken keşiften preklinik iş akışlarına kadar olan süreçte konumlandırılmaktadır.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026