Güçlü TCR Sinyallerine Timosit Yanıtını Modüle Eden Kinaz İnhibitörlerinin Belirlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 6:42 dk. • July 8th, 2025
Çok oyuklu bir plakada fareler timosit hücreleri ile başlayın. Anti-CD3 ve anti-CD28 antikorları ile kaplanmış manyetik boncuklar ekleyin. Kuyucukların bir alt kümesine, test kinaz inhibitörünün uygun bir konsantrasyonunu ekleyin. Kuluçkaya yatmak.
Antikorlar, çift pozitif timositler üzerindeki hücre yüzeyi CD3 ve CD28 reseptörlerine bağlanır ve bunları aktive ederek T hücresi reseptörlerinin, TCR'lerin aşağı regülasyonuna ve sitozolik protein kinazın aktivasyonuna neden olur.
Bu protein kinazlar, aşağı akış sinyal yollarını aktive ederek hücre yüzeyi CD69 ekspresyonunun artmasına ve sitozolik kaspaz-3 aktivasyonuna yol açar. Aktive edilmiş kaspaz-3, temel hücresel proteinleri parçalar - timosit apoptozunu başlatır.
Kinaz inhibitörü ile tedavi edilen hücrelerde, inhibitörler sitozolik kinazları bloke ederek CD69 ekspresyonunu ve kaspaz-3 aktivasyonunu modüle eder.
Timositlerin TCR, CD4 ve CD8 ko-reseptörlerine ve CD69 reseptörlerine bağlanan florofor etiketli bir antikor kokteylinde pipetleyin. Timositleri sabitlemek ve geçirgen hale getirmek için bir tampon ile muamele edin.
Sitozolik kaspaz-3'e bağlanan florofor etiketli bir anti-kaspaz-3 antikoru ile inkübe edin. Akış sitometris
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin