Antijen Kaplı Bir Lamel Üzerinde B Hücresi Aktivasyonu

B hücresi aktivasyonu, bir bağışıklık tepkisi ortaya çıkarmak için yüzeylerinde B hücresi reseptörleri, BCR'ler tarafından antijenlerin tanınmasını içerir.

B hücresi aktivasyonunu in vitro olarak incelemek için, polimerik bir malzeme üzerinde hareketsiz hale getirilmiş antijenler ve anti-CD45R antikorları içeren bir lamel ile başlayın. Negatif yüklü antijenler ve antikorlar, elektrostatik etkileşimler yoluyla lamel üzerindeki pozitif yüklü polimerlerle etkileşime girer.

Kaplanmış lamelleri B hücreleri içeren bir ortamla kaplayın ve inkübe edin. B hücrelerinin transmembran proteini olan CD45R, hareketsizleştirilmiş antikorlarla etkileşime girerek hücre yapışmasını kolaylaştırır.

Yapışık B hücresi üzerindeki BCR'ler bir antijen ile etkileşime girerek bir bağışıklık sinapsı oluşturur - hücre sinyalizasyonu ve antijen içselleştirmesi için koordinasyon bölgesi. Bu, hücre iskeletinin yeniden şekillenmesini teşvik eder ve antijenlerle temas halinde hücre yüzeyini artıran hücre yayılmasını başlatır.

Daha fazla yeniden şekillenme, BCR'ye bağlı antijenlerin immün sinapsın merkezine doğru hareketine neden olur. Bu hücresel yeniden düzenleme, sentrozomun, lizozomlar da dahil olmak üzere hücre içi organelleri sinapsa doğru yönlendiren sinaptik zarın yakınında yeniden konumlandırılmasına neden olur.

Lizozomların zar ile füzyonu, antijen-BCR komplekslerinin içselleştirilmesine yol açar. İçselleştirilmiş antijenler peptit fragmanlarına işlenir, sınıf II majör histouyumluluk kompleksi veya MHC moleküllerine yüklenir ve son olarak aktive edilmiş B hücreleri üzerinde sunulur.

Antijen çözeltisini, PBS'ye anti-BCR ve B220'yi sırasıyla mL başına 10 mikrogram ve mL başına 7.5 mikrogramlık bir nihai konsantrasyona ekleyerek hazırlayın. Daha sonra, lamel parafin film ile kaplı 24 oyuklu bir plakanın kapağının üzerine yerleştirin ve 40 mikrolitre antijen çözeltisi ekleyin. Plakayı kapatın ve ardından gece boyunca dört derecede inkübe edin.

Lameli aktivasyonu başlatmak için önce PBS ile yıkayın ve birkaç dakika kurumasını bekleyin. Daha sonra, 150.000 B hücresi ekleyin ve farklı zaman noktaları için 37 derecede inkübe edin. Her iki durumda da, boncuklar veya antijen kaplı slaytlarla aktive ederken, en uzun zaman noktasından başlamanızı ve ardından daha kısa olanlara geçmenizi öneririz.