Enfekte İnsan Dokusundan Elde Edilen Hücrelerde İnflamatuar Mediatörlerin Miktar Tayini

0 views • 3:45 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir enfeksiyon sırasında, aktive edilmiş lenfositler, bir bağışıklık tepkisi ortaya çıkarmak için inflamatuar mediatörleri - sitokinleri - serbest bırakır.

Enfekte bir dokudaki enflamatuar mediatörleri ölçmek için, insan akciğer dokusundan türetilmiş bağışıklık hücrelerini içeren bir hücre süspansiyonu ile başlayın.

Hücreleri, solunum yolu patojenik bir bakteri olan Haemophilus influenzae ile inkübe edin. Bakterilerin yüzey antijenleri, fagositik bağışıklık hücreleri üzerindeki örüntü tanıma reseptörleri ile etkileşime girer. Bu, bakteri içselleştirmesini, daha küçük peptitlere işlemeyi ve peptitin ana histouyumluluk kompleksi molekülü tarafından sunumunu başlatır.

Fagositik hücreler üzerindeki antijen-MHC-II molekülü, ko-stimülatör reseptör etkileşimleri ile birlikte T hücresi reseptörleri yoluyla T lenfositlere bağlanır ve bu da T lenfosit aktivasyonu ve proinflamatuar sitokinlerin üretimi ile sonuçlanır.

Hücreleri Golgi blokerleri ile tedavi edin, sitokin salınımını bozun - hücrelerin içinde birikmelerine neden olur. Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için hücreleri bir bloke edici tamponla yıkayın.

Hücre süspansiyonunu, özellikle insan T lenfosit yüzey belirteçlerine bağlanan ve lenfositlerin etiketlenmesini sağlayan florofor etiketli antikorların bir karışımı ile boyayın.

Hücreleri sabitleyin ve gözenek oluşturan bir yüzey aktif madde ile geçirgen hale getirin. Geçirgen hücreleri, hücrelere giren ve spesifik sitokinlerle etkileşime giren florofor işaretli anti-sitokin antikorları ile inkübe edin.

Akış sitometrisi kullanarak, bakteriyel enfeksiyona bağlı inflamatuar mediatör üretimi ile ilişkili olarak etiketli lenfositler içindeki sitokin floresan sinyalini ölçün.

Lobektomi örneğinin yaklaşık 20 ila 40 gramını 3 ila 5 milimetreküp bölümlere ayırın. Bunları 50 mikrolitrelik steril bir hazneye yerleştirin ve uygun bir toplayıcı kullanarak dokuyu mekanik olarak parçalayın. Doku ayrışmasından sonra, kırmızı kan hücrelerini gösterildiği gibi parçalayın ve hücreleri steril RPM'de yeniden süspanse edin. Ardından, hücreleri 100 mikrometrelik steril bir naylon ağdan süzün ve tripan mavisi dışlama yöntemini kullanarak canlı hücrelerin sayısını sayın.

Enfeksiyon tahlili için, RPMI'deki akciğer hücrelerini tüp başına mililitre başına 4 milyon hücrelik bir nihai konsantrasyona yeniden süspanse edin. Ardından, hücreleri hücre başına 100 bakterilik bir MOI'de enfekte edin. Tüplerde gaz transferine izin vermek için kapağı yarım tur gevşetin. Hücreleri tüp döndürücüye yerleştirin ve 12 RPM'de döndürürken 37 santigrat derecede inkübe edin. Stimülasyondan bir saat sonra, sitokinlerin hücre dışı ihracatını önlemek için Brefeldin A ekleyin ve hücre süspansiyonlarını rotasyonla 16 ila 22 saat daha inkübe edin.

Ertesi gün, hücre süspansiyonunu %1 sığır serum albümini ve %0.01 sodyum azid içeren 500 mikrolitre PBS ile yıkayın. Daha sonra, bir saat boyunca belirli insan lenfosit hücre yüzey belirteçleri için hücre süspansiyonunda kalın. Daha sonra, hücreleri PBS ile yıkayın ve daha önce gösterildiği gibi sabitleyin ve geçirgen hale getirin. Daha sonra, hücreleri hücre içi sitokin boyama antikorları ile bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra, hücreleri yıkayın ve bir akış sitometresinde veri toplamadan önce 100 mikrolitre PBS'de yeniden süspanse edin.

09:25

Bir Geçirgen Membran Ekle tabanlı Enfeksiyon Sisteminin Uygulanması memeli konakçı hücreleri üzerinde salgılanan Bakteriyel Toksinler Etkilerinin Eğitim için

Related Videos

0 Views

10:10

Deneysel Enfeksiyon Listeria monocytogenes Ana İnterferon-γ Yanıtları incelenmesi için Bir Model Olarak

Related Videos

0 Views

09:11

Listeria monocytogenes enfeksiyonu sonrasında Mouse dalağında In situ Interferon gama üretiminin görüntülenmesi

Related Videos

0 Views

08:54

Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Doku Özel Ölçüm İnsan In-Vivo Biyoassay

Related Videos

0 Views

06:29

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Related Videos

0 Views

07:58

Monositler ve İnsan Kan Küçük Örneklerden Dendritik Hücrelerde Lineage özgü Toll-like reseptör-aracılı Sinyali Kantitatif Görüntüleme

Related Videos

0 Views

02:55

İnsan Mukozal Astar Sıvısında İmmün Mediatör Seviyelerinin Miktar Tayini

Related Videos

0 Views

12:21

Mikro ölçekli Hücre Stimülasyon deneyler için Çok Yönlü Otomatik Platformu

Related Videos

0 Views

09:00

Pulmoner Ortamda İmmün Hücrelerin ve Proinflamatuar Mediatörlerin Karakterizasyonu

Related Videos

0 Views

07:51

Akış ve Esneme Altında Biyomalzemelerin Enflamatuar ve Rejeneratif Kapasitesini Değerlendirmek için Çok İşaretli Bir Biyoreaktör

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026