JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:47 dk. • July 8th, 2025
Opsoninlerle etiketlenmiş bakteriler, spesifik nötrofil reseptörleri tarafından tanınır ve reaktif oksijen türleri veya ROS ile fagositozu tetikler, salınımı ve bakteriyel bozunmayı tetikler.
İn vitro nötrofiller tarafından ROS üretimini ölçmek için çok kuyulu bir plaka alın. Test kuyusu, hücre dışı matriks filme gömülü bakteriler içeren bir Staphylococcus aureus biyofilmi içerir. Kontrol kuyusu biyofilm içermez.
Biyofilmi insan serumu ile inkübe edin, serum opsoninlerinin biyofilmi opsonize etmesine izin verin.
Serumu aspire edin. Bağlanmamış opsoninleri çıkararak tamponla yıkayın. Kuyucuklara nötrofiller ve luminol ekleyin - kemilüminesans bir bileşik. Santrifüj, nötrofilleri biyofilmin yakınına getirir.
Bir plaka okuyucu kullanarak, zaman içindeki lüminesansı ölçün.
Biyofilm içeren kuyuda, nötrofiller biyofilmin opsoninlerine bağlanarak nötrofil aktivasyonuna ve fagozomlara bakteriyel içselleşmeye neden olur. Spesifik sinyal yolları aktive olur ve fagozomlar üzerinde NADPH oksidaz oluşumuna neden olur.
NADPH oksidaz, NADPH'den moleküler oksijene elektron transferini katalize ederek bakterileri parçalayan ROS üretir. Ayrıca, hücre zarındaki NADPH oksidaz, ROS'u hücre dışı olarak
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin