JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:21 dk. • July 8th, 2025
Bir makrofaj kültürü içeren çok kuyulu bir plaka alın. Floresan protein eksprese eden Listeria monocytogenes, Lm ile enfekte.
Lm üzerindeki proteinler, spesifik makrofaj reseptörlerine bağlanarak bakterileri bir fagozom içinde içselleştirir. Ek olarak, Lm, fagozom zarını bozan gözenek oluşturan toksinler salgılar, bakterileri sitozole salar, burada çoğalırlar ve konakçı aktin filamentleri ile çevrili olurlar.
Lm üzerindeki aktin düzeneğini indükleyen ActA proteinleri, bakterinin arka ucunda sürekli aktin polimerizasyonunu indükler. Üretilen aktin kuyruklu yıldız kuyruğu, Lm'yi sitozolden iter ve makrofaj hücre zarına nüfuz ederek polimerize aktin zarflı Lm'yi ortama salar.
İnkübasyon sonrası, hücre dışı, aktin bağlı, Lm içeren ortamı bir dizi kuyudan toplayın ve sabitleyin. Lm'yi paraformaldehit kullanarak sabitleyin. Damıtılmış su ekleyin, makrofajları yırtın ve hücre içi Lm'yi serbest bırakın. Hücre içi Lm'yi toplayın ve numuneyi paraformaldehit kullanarak sabitleyin.
Diğer kuyucuklarda, hücre dışı Lm'yi ortadan kaldırmak için ortamı hücre geçirimsiz gentamisin içeren ortamla değiştirin. Taze medya ile değiştirin ve istenen süre boyunca inkübe edin.
İnkübasyon sonrası, hücre dışı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin