E. coli Enfeksiyonunu Takiben Drosophila melanogaster'de E. coli Bakteri Yükünün Ölçülmesi

E. coli enjekte edilen yetişkin Drosophila melanogaster sinekleri ile başlayın. Enjeksiyondan sonra istenen zaman noktalarında, anestezi uygulanmış sinekleri buz üzerinde ayrı mikrosantrifüj tüplerine aktararak metabolik aktivitelerini azaltın.

Tampon ekleyin ve sinekleri homojenize edin, dokuyu parçalayın, E. coli ve endojen bağırsak mikrobiyotasını serbest bırakın.

Her bir E. coli içeren sinek homojenatı çok kuyulu plaka kuyularına aktarın. Kalan kuyuları tamponla doldurun. E. coli içeren homojenatın seri seyreltmesini gerçekleştirin.

Seyreltilmiş homojenat süspansiyonunu, en düşük seyreltmeden başlayarak, bir besleyici agar plakası üzerinde her bir kuyudan ve ayrı noktalardan biriktirin. Lekelerin agar içine emilmesine izin verin. E. coli çoğalmasını sağlamak için plakayı gece boyunca inkübe edin ve görünür koloniler oluşturun. Kuluçka süresi, sineğin endojen bağırsak mikrobiyota kolonilerinin oluşumunu önlemek için kritik öneme sahiptir.

Sayılabilir örtüşmeyen kolonilere sahip seyreltmelerden her sinek için E. coli kolonilerini sayın. Enjeksiyondan sonra farklı zaman noktalarında başlangıç homojenatındaki koloni oluşturan birimi - canlı bakteri yükünü - hesaplayın.

Zamanla azal