JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:44 dk. • July 8th, 2025
NOD benzeri reseptör P3 veya NLRP3, inflamatuar aktivasyonu tespit etmek için, NLRP3 proteinlerini eksprese eden aktive makrofajlar içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Hücreleri iyonofor ve glisin içeren ortamlarla tedavi edin. İyonoforlar, potasyum iyonu akışını indükleyerek NLRP3 proteinlerini aktive eder ve oligomerize eder. Oligomerize NLRP3, pro-kaspaz-1'in bağlanmasını kolaylaştırarak NLRP3 inflamatuar kompleksini oluşturan adaptör proteinleri işe alır.
İnflamatuarda, yakınlık pro-kaspaz-1 oto-bölünmeyi tetikler, aktif kaspazları serbest bırakır, piroptoz ve nükleer yoğunlaşmayı başlatır. Ek olarak, glisin hücre yapısını stabilize ederek hücre lizizini önler.
Makrofajları, bir kaspaz-1 bağlanma grubu ve bir amino asit dizisi ile bağlanmış bir florofor içeren floresan raportör probları ile tedavi edin. Aktive edilmiş kaspaz-1, probun amino asit dizisini tanır ve kaspaz bağlama grubuna bağlanarak görselleştirilmesini sağlar.
Hücreleri sabitleyin ve çekirdekleri lekelemek için floresan boya ile kaplayın. Floresan mikroskobu altında görüntü.
Mavi yoğunlaştırılmış çekirdeklere ve aktif kaspaz-1'in yeşil floresan odaklarına sahip makrofajları sayın, bu da NLRP3 inflamatuar aktivasyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin