Makrofajlarda İnflamatuar Kompleks Oluşumunu İncelemek İçin İn Vitro Bir Teknik

0 görüntüleme3:06 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Primer makrofaj kültürü içeren bir plaka ile başlayın.

Makrofajlar üzerindeki toll benzeri reseptörlere bağlanan ve protein NLR ailesi pyrin alanı içeren 3 veya NLRP3'ün yukarı regülasyonunu tetikleyen bakteriyel lipopolisakkarit, LPS'yi tanıtın.

Potasyum iyonlarının dışarı akışına aracılık eden bir iyonofor ekleyin. Azalmış sitozolik potasyum NLRP3'ü aktive eder. Aktive edilmiş NLRP3, oligomerleşir ve bir adaptör proteinin alımını indükler, bu da pro-kaspaz-1'i işe alarak bir inflamatuar oluşturur.

Oto-proteoliz, pro-kaspaz-1'i, inflamatuar hücre ölümüne veya piroptoza aracılık eden aktif kaspaz-1'e dönüştürür. Piroptoz sırasında DNA hasarı nükleer yoğunlaşmaya yol açar.

Hücreleri sabitleyin ve geçirgen hale getirmek için bir deterjanla işlemden geçirin.

İnflamatuar ile ilişkili adaptör proteinine bağlanan bir birincil antikor ve birincil antikora bağlanan ve iltihabı etiketleyen floresan etiketli bir ikincil antikor ekleyin.

Çekirdeği etiketlemek için bir floresan nükleik asit boyası ekleyin. Bir floresan mikroskobu altında, hücreler yoğunlaştırılmış çekirdekleri gösterir - piroptozu gösterir - ve adaptör proteinlerin odaklarını gösterir - iltihap oluşumunu gösterir.

Nigerisin ile muamele edilen hücrelerin immünoflorokimyasal analizi için, prob etiketli hücreleri yıkayın ve hücreleri, ışıktan korunarak buz üzerinde 30 dakika boyunca oyuk başına 250 mikrolitre fiksasyon ve geçirgenlik çözeltisi içinde inkübe edin.

Makrofajları taze yıkama tamponu ile üç kez daha yıkayın ve hücreleri, buz üzerinde bir saat boyunca oyuk başına bir C-terminal kaspaz alım alanı veya ASC içeren apoptozla ilişkili leke benzeri proteine karşı 250 mikrolitre birincil antikor ile etiketleyin.

İnkübasyonun sonunda hücreleri yıkayın ve numuneleri 250 mikrolitre uygun floresan boya konjuge ikincil antikor ile buz üzerinde bir saat daha etiketleyin ve son 5 dakika boyunca 4 mikrolitre uygun bir floresan nükleer boyama boyası ekleyin.

Hücreleri soğuk yıkama tamponunda 3 kez yıkadıktan sonra, lameller gösterildiği gibi 7 mikrolitre solma önleyici montaj ortamı ile slaytlara monte edin ve makrofajları floresan konfokal mikroskopi ile görüntüleyin.

08:47

Caspase harekete geçirmek Bimolecular floresan uluslara kullanarak yolları kadar aydınlatma

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:41

İnsan Monosit Kaynaklı Makrofajlarda İnflamatuar Kaspazların İndüklenen Yakınlığının Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:23

Doğuştan İmmün Hücre Ölümünü Değerlendirmek için Kaspaz Aktivasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:19

İnsan Monosit Kaynaklı Makrofajlarda Kaspaz Aktivasyonunun Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:44

Floresan mikroskobu ile inflamatuar aktivasyonun tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:01

Makrofajlarda Multipl Kaspazların Aktivasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:04

Aktivasyon ve İnsan monosit türevli dendritik hücreler, IL-1β kullanarak NLRP3 Inflammasome Aktivitenin Ölçümü

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:47

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:54

Nucleofection İnsan THP-1 Makrofagların Yüksek Verimli Transfeksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:07

"Fagozomun Kapatma Deneyi" kullanma Üç Boyutta fagozomun Formasyonu Visualize'a Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu (TIRFM)

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026