JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:06 dk. • July 8th, 2025
Primer makrofaj kültürü içeren bir plaka ile başlayın.
Makrofajlar üzerindeki toll benzeri reseptörlere bağlanan ve protein NLR ailesi pyrin alanı içeren 3 veya NLRP3'ün yukarı regülasyonunu tetikleyen bakteriyel lipopolisakkarit, LPS'yi tanıtın.
Potasyum iyonlarının dışarı akışına aracılık eden bir iyonofor ekleyin. Azalmış sitozolik potasyum NLRP3'ü aktive eder. Aktive edilmiş NLRP3, oligomerleşir ve bir adaptör proteinin alımını indükler, bu da pro-kaspaz-1'i işe alarak bir inflamatuar oluşturur.
Oto-proteoliz, pro-kaspaz-1'i, inflamatuar hücre ölümüne veya piroptoza aracılık eden aktif kaspaz-1'e dönüştürür. Piroptoz sırasında DNA hasarı nükleer yoğunlaşmaya yol açar.
Hücreleri sabitleyin ve geçirgen hale getirmek için bir deterjanla işlemden geçirin.
İnflamatuar ile ilişkili adaptör proteinine bağlanan bir birincil antikor ve birincil antikora bağlanan ve iltihabı etiketleyen floresan etiketli bir ikincil antikor ekleyin.
Çekirdeği etiketlemek için bir floresan nükleik asit boyası ekleyin. Bir floresan mikroskobu altında, hücreler yoğunlaştırılmış çekirdekleri gösterir - piroptozu gösterir - ve adaptör proteinlerin odaklarını gösterir - iltihap oluşumunu gösterir.
Nigerisin il
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin