JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:02 dk. • July 8th, 2025
Lipopolisakkarit ile astarlanmış makrofajlar içeren bir tahlil plakası alın.
Hazırlama, aktif olmayan proinflamatuar sitokin öncülerinin ve NLRP3 proteinlerinin ekspresyonunu arttırır.
İyon akışını teşvik eden bir potasyum iyonoforu olan nigerisin ekleyin. Bu, hücre içi potasyum seviyelerini bozarak NLRP3 proteinlerini tetikleyerek büyük bir kompleks oluşturur.
Oligomerize NLRP3, adaptör proteinleri olan ASC'yi işe alır ve polimerizasyonlarına neden olur. ASC filamentleri, bir multiprotein kompleksi olan NLRP3-inflamatuar oluşturan pro-kaspaz-1'i işe alır.
Pro-kaspaz-1, yakınlık kaynaklı otomatik aktivasyona uğrar ve kaspaz-1 oluşturur. Kaspaz-1, proinflamatuar sitokin ve gasdermin-D proteinini parçalayarak bir plazma zarı gözeneği oluşturur.
Bu, sitokin sekresyonu ve inflamatuar programlanmış hücre ölümü, piroptoz, laktat dehidrojenaz veya LDH dahil olmak üzere hücre içi içeriklerin serbest bırakılması ile sonuçlanır. LDH içeren süpernatanı toplayın.
Substrat karışımı ekleyin - laktat, iyodonitrotetrazolyum menekşe veya INT boyası, NAD + ve terletaz. LDH, NAD + 'yı indirgeerken laktatı piruvata oksitler. Diaphorase, kırmızı renkli formazan oluşturarak INT'nin azalmasını katalize e
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin