JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:57 dk. • July 8th, 2025
Serbest bırakılan hücre içi bileşenlere sahip nötrofil homojenat içeren bir cam tüp alın.
Lipid-lipid ve lipid-protein etkileşimlerini bozan polar bir çözücü olan metanol ekleyin. Metanolün doğal polaritesi, polar lipitleri eşit olarak dağıtır ve onları çözündürür. Daha sonra, polar olmayan lipitlerle etkileşime girerek dağılmalarına ve çözünmelerine neden olan polar olmayan bir organik çözücü olan kloroform ekleyin.
Protein içeren peleti süpernatan içeren lipitlerden, polisakkaritlerden ve hücre kalıntılarından ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı taze bir cam tüpe aktarın. Kloroform ve damıtılmış su ekleyin. Numuneyi santrifüjleyin.
Su ilavesi kendiliğinden bifazik bir sistem oluşturur ve biyomolekülleri alt kloroform ve üst su-metanol katmanları içinde böler.
Kloroform tabakası çözünmüş polar olmayan lipitleri içerirken, üst tabaka lipid olmayan kirleticiler ve daha fazla polar lipit içerir. Lipid içeren tabakayı bozmadan üst su-metanol tabakasını çıkarın.
Çözücüyü lipitlerden çıkarmak için bir vakum yoğunlaştırıcı kullanın. Daha fazla kullanana kadar daha düşük sıcaklıklarda saklayın.
Lipitleri insan periferik kanından türetilen nötrofillerden izole etmek için hazırlanan nö
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin