JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:49 dk • July 8th, 2025
Kulakları epilasyondan arındırılmış anestezi uygulanmış bir fareyi alın ve test antijenini (uygun bir araç solüsyonunda karıştırılmış bir hapten) maruz kalan cilde uygulayın. Araç çözümü, alttaki dermise ulaşmak için en dıştaki epidermis tabakasından hapten penetrasyonunu kolaylaştırır.
Hapten, cilt proteinlerine bağlanarak antijen sunan hücreler veya APC'ler tarafından tanınan bir immünojen oluşturur. Yutulduktan sonra, APC'ler immünojeni yüzeylerinde işler ve görüntüler.
APC'ler lenf düğümlerine göç eder, immünojeni saf T hücrelerine sunar ve onları aktive eder. Aktive edilmiş hücreler, bir alt kümesi cilde göç eden astarlanmış bellek T hücrelerine farklılaşır.
Hapten yeniden maruz kaldıktan sonra, APC'ler immünojeni astarlanmış T hücrelerine sunarak proinflamatuar sitokin salınımını indükler.
Sitokinler, keratinositleri ve mast hücrelerini, dolaşımdaki nötrofillere bağlanan kemokinleri serbest bırakmak için tetikler ve ekstravazasyonlarını kolaylaştırır. Ekstravaze nötrofiller iltihap bölgesine ulaşır.
Sitokinler, proteolitik enzimler ve reaktif oksijen türleri üretmek için nötrofilleri aktive eder - doku hasarına neden olur ve iltihabı arttırır.
Başlamak için, fareyi intraperitoneal bir anestezik kokteyl enjeksiyonu ile uyuşturun ve bir ayak parmağı tutam testi ile yeterli sedasyonu onaylayın. Ardından, her iki kulağın sırt yüzeyine tüy dökücü krem sürün. Bir dakika içinde silin ve cildi suyla yıkayın.
Uygulamaların yapıldığı kulağın kalınlığını bir mikrometre kullanarak ölçün. Daha sonra, anesteziden kurtulduktan sonra fareyi kendi kafesine geri koyun ve daha fazla test yapmadan önce farenin en az üç gün dinlenmesine izin verin.
Üç gün sonra, fareyi yeniden uyuşturun ve tahriş olmadığından emin olmak için kulak kalınlığını tekrar ölçün. Daha sonra, sağ kulağın her iki tarafına 12.5 mikrolitre% 1.25 oksazolon uygulayın ve sol kulağın her iki tarafına 12.5 mikrolitre aseton-zeytinyağı araç solüsyonu uygulayın.
Her zaman olduğu gibi, farenin anesteziden kurtulduğunu gözlemleyin. 24 saat sonra, oksazolonun neden olduğu cilt iltihabının meydana geldiğinden emin olmak için anestezi altında kulağın kalınlığını tekrar ölçün.