JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:25 dk. • July 8th, 2025
Makrofajlar içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Test kuyularına Cryptococcus neoformans ekleyin, kontrol kuyuları ise sadece makrofajlar içerir.
Makrofajlar, fagozomlar içindeki fagositoz mantarları.
Fagosite edilmemiş mantarları çıkarmak için tamponla yıkayın. Antibiyotik içermeyen ortam ekleyin. Kuluçkaya yatmak.
Fagozom lizozomla birleşerek bir fagolizozom oluşturur. Mantarlar fagolizozom pH'ını modüle eder ve sert fagolizozomal koşullarda hayatta kalmak için içsel mekanizmalara sahiptir. Mantarlar fagolizozomal membrana nüfuz eder ve polisakkarit dolu veziküllerin sitozolik birikimi ile birlikte çoğalır.
Hücre içi mantar kalışları ve replikasyonu, hücre ölüm yollarını tetikleyerek hücresel hasara neden olur. Bu, makrofaj lizizine ve laktat dehidrojenaz veya LDH dahil olmak üzere hücre içi içeriğin ortama salınmasına neden olur.
LDH içeren ortamları farklı zaman noktalarında toplayın. Maksimum hücresel LDH salınımı için kontrol makrofajlarını benzer zaman noktalarında parçalayın. Tahlil karışımını toplanan ortama ve lizatlara ekleyin. LDH, laktatı piruvata dönüştürerek NAD + 'yı azaltır. Diaphorase, tetrazolium tuzunu azaltarak kırmızı bir formazan ürünü oluşturur.
Bir plaka okuyu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin