JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:15 dk. • July 8th, 2025
Geçirgen bir zar sisteminin alt bölmesinde memeli konakçı hücreleri tohumlayarak başlayın.
Streptokok - streptolizin S veya SLS toksini salgıladığı bilinen patojenik bir bakteri olan Streptococcus'u zar ekine ekleyin. SLS toksini membran gözeneğinden yayılır ve konak hücreye ulaşır.
Membrana bağlı sodyum-bikarbonat kotransporterleri, hücresel homeostazı koruyarak iyon taşınmasını düzenler. Toksin bu ortak taşıyıcılara bağlanarak iyon taşınmasını bozar ve konakçı hücrelerde ozmotik strese neden olur.
Bu, mitojenle aktive olan bir protein kinaz yolu olan p38 MAPK dahil olmak üzere birkaç aşağı akış sinyal kaskadını aktive eder. Aktive edilmiş p38 MAPK aşağı akış hedeflerini fosforile ederek bakterilere karşı hücresel bir tepki başlatır.
Ardından, geçirgen membran ekini çıkarın. Ortamı konakçı hücrelerin üzerine aspire edin. Hücresel içeriği serbest bırakmak için lizis tamponu ekleyin. Hücre kalıntılarını peletlemek için santrifüjleyin.
Çözünür lizat bileşenleri içeren süpernatanı ve çözünmeyen lizat bileşenleri içeren peleti toplayın. Daha fazla analiz için numuneleri saklayın.
Tedaviden hemen önce, hücreleri yıkamak için 1X PBS kullanın. Daha sonra, altı oyuklu plakalara farmakoloji
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin