Bakterilerle enfekte olmuş hücrelerde kalsiyum tepkisini incelemek için bir görüntüleme tekniği

0 görüntüleme3:43 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre içi kalsiyumun floresan indikatörü ile yüklenmiş bir insan epitel hücresi kültürü içeren bir görüntüleme odası alın.

Kalsiyum iyonları içeren bir büyüme ortamı ekleyin. Patojenik bir bakteri olan Shigella'yı tanıtın ve kuluçkaya yatırın.

Bakteri salgı sistemi konak hücreye nüfuz eder ve istila efektörlerini serbest bırakır. İstila, aktinin yeniden düzenlenmesini tetikleyerek bakterilerin etrafında zar fırlaması oluşturur.

İnvazyon bölgesinde, plazma zarı üzerindeki fosfolipaz C veya PLC aktive edilir ve inositol trifosfat reseptörleri endoplazmik retikulum veya ER üzerinde kümelenir.

PLC, membran fosfatidilinositol 4,5-bifosfatı, yoğun aktin ağı nedeniyle lokal olarak biriken inositol trifosfata veya IP3'e hidrolize eder.

IP3, ER'deki reseptörlere bağlanarak kalsiyum salınımına neden olur. Kalsiyum göstergeleri salınan iyonlara bağlanır ve yerel bir kalsiyum tepkisi göstererek floresan yayar.

IP3 aktin boyunca yavaşça yayılır, ER kalsiyum seviyesini daha da tüketir ve bir plazma zarı kalsiyum kanalını aktive ederek kalsiyum akışına yol açar.

Hücre boyunca floresan, gecikmiş küresel kalsiyum tepkisini gösterir.

Fluo-4 hücrelerini içeren lamel bir görüntüleme veya cam tabanlı odaya yerleştirin. Potansiyel olarak hücre lizizinden kaynaklanan bileşikleri uzaklaştırmak için numuneyi üç kez yıkamak için EM tamponu kullanın. Ardından, bir mililitre EM tamponu ekleyin. Odayı, 33 santigrat derecede ısıtılmış ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu aşamasına yerleştirin. Bir mikroskopi alanı seçin ve Fluo-4 floresan sinyalini optimize etmek için gerekirse maruz kalma süresi ve gruplama dahil olmak üzere alım parametrelerini ayarlayın.

Numuneye bakteri eklemek için, hazneden 500 mikrolitre EM tamponunu dikkatlice çıkarın ve 0.05'lik bir son OD600 elde etmek için 500 mikrolitre bakteri süspansiyonu ekleyin. Hemen bir alım yapın veya bakterilerin hücrelere tortu bırakmasına izin vermek için 10 dakika bekleyin. Edinme akışının sonunda, hücrelere temas eden bakterileri ve bakteri istila bölgeleriyle ilişkili zar çıkıntılarını görselleştirmek için seçilen alanın bir faz kontrast görüntüsünü elde edin.

Edinme prosedürünü, görüntü alımlarının süresine, dosya kaydetmeye ve tüm süreci kapsayacak şekilde yeni bir alan seçimine uygun aralıklarla tekrarlayın. Edinme prosedürünün sonunda, kalsiyum sinyallerinin maksimum genliğini belirlemek için numuneye iki mikromolar kalsiyum iyonofor iyonomisin ekleyin. Sinyal stabilize olana kadar her 3 ila 5 saniyede bir, genellikle 10 dakikadan daha kısa bir süre için görüntü alın.

Kalsiyum yokluğunda floresan sinyalini belirlemek için kalsiyum şelatörü EGTA'yı 10 milimolar nihai konsantrasyona ekleyerek takip edin. Sinyal stabilizasyonuna kadar her 3 ila 5 saniyede bir, genellikle 10 dakikadan daha kısa bir süre için görüntü alın. Metin protokolüne göre görüntü analizi yapın.

08:03

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:15

Multiparametre Optofluidik Platform Kullanılarak Kalsiyum Akını ve HIV-1 Enfeksiyonunun Tek Hücreli Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:11

Derin Beyin In Vivo Kalsiyum Görüntüleme için Stereotaksik Viral Enjeksiyon ve Degrade İndeks Lens İmplantasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:15

Kortikal nöronlar kullanarak Fura-02:00 Kalsiyum Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:23

Kalsiyum Görüntüleme: Canlı C. elegans'ta Nöral Aktiviteyi Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:06

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging'de elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:30

Görüntüleme Yerel Ca 2+ Kültürlenmiş memeli hücrelerinde sinyaller

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:56

Epitel hücrelerinin Shigella enfeksiyon sırasında CA2 + yanıtları görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:50

İyi Kontrollü, Lokalize Olmayan Titreşimli Serbest Davranan Caenorhabditis elegans'ta Kalsiyum Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:41

Kalsiyum Görüntüleme Tekniği ile Nöron-Glia Devresindeki Değişimlerin Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026