İnsan T Hücreleri ile SEB Yüklü Raji Hücreleri Arasındaki İmmün Sinapsların Görüntüleme Akış Sitometrisi Kullanılarak Analizi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:28 dk. • July 8th, 2025
Yüksüz Raji hücreleri ve Staphylococcus aureus enterotoksin B veya SEB yüklü Raji hücreleri içeren akış sitometri tüplerini alın.
Bu SEB yüklü Raji hücreleri, sınıf II MHC moleküllerine komplekslenmiş süperantijen SEB içeren vekil antijen sunan B hücreleri olarak işlev görür.
Pan-lökositlerle inkübe edin.
T hücresi reseptörleri, T hücreleri üzerindeki TCR'ler, Raji hücreleri üzerindeki SEB'lere bağlanır ve bu, ko-uyarıcı sinyallerle birlikte, T hücresi aktivasyonuna yol açan kararlı bir hücre-hücre bağlantısı, bir bağışıklık sinapsı oluşturur.
Bu, hücre içi sinyal yollarını tetikleyerek, sinaps içindeki sinyal moleküllerinin ve yüzey reseptörlerinin kümelenmesiyle aktin hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesine neden olur.
Kuluçka sonrası, hücresel yapılarını korumak için hücreleri sabitleyin. Hücre içi hedeflere erişmek için hücreleri geçirgen hale getirin.
Sırasıyla TCR kompleksinde, aktin filamentlerinde ve DNA'da CD3'e bağlanan florofor etiketli anti-CD3 antikorları, falloidin ve DAPI ekleyin.
Bir görüntüleme akış sitometresi kullanarak, SEB varlığında sinapstaki zenginleşmelerini belirlemek için CD3 ve aktinden gelen floresan sinyalleri görselleştirin.
Bir mililitre taze çekilm
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin