JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:41 dk. • July 8th, 2025
Bazı gram negatif bakteriyel patojenler konakçı hücrelerle temas eder ve efektör proteinleri enjekte etmek için salgılama sistemleri kullanarak hücre istilasını kolaylaştırır.
Efektör proteinleri in vitro olarak memeli hücrelerine iletmek için, memeli hücrelerini soğutulmuş bir küvete pipetleyin. Streptavidin bağlayıcı peptit etiketli bakteriyel efektör proteinleri ekleyin ve karıştırın.
Elektroporasyon gerçekleştirin. Çalışma sırasında, kısa elektrik darbeleri, geçici gözenekler oluşturmak için konak hücre zarı lipid çift tabakasını bozar ve efektör proteinlerin hücresel girişini kolaylaştırır. Hücreleri, ortam içeren bir cam plaka üzerine yerleştirin, böylece hücrelerin iyileşmesine ve plakaya yapışmasına izin verin. Gözenekler yeniden kapanır ve proteinleri içinde hapseder.
Hücre iyileşmesini takiben, hücre içi hedeflere antikor erişimi için hücreleri sabitleyin ve geçirgenleştirin. Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için protein içeren bir bloke edici çözelti ile inkübe edin. Hücre içi efektör proteinler üzerindeki streptavidin bağlayıcı peptit etiketine spesifik olarak bağlanan birincil antikorları ekleyin.
Görselleştirme için efektör proteinlere bağlı birincil anti
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin