JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:00 dk. • July 8th, 2025
Nötrofillerde bir floresan proteini ifade etmek için tasarlanmış anestezi uygulanmış bir fareyi ele alalım. Sırtı tıraş edin ve dairesel bir kesim oluşturun. Altındaki bir bağ dokusu tabakası olan fasyayı ortaya çıkarmak için kesilen cildi çıkarın.
Biyolüminesans üretmek için genetik olarak modifiye edilmiş patojenik bir bakteri olan Staphylococcus aureus'un süspansiyonunu içeren bir şırınga alın. Fasya ile alttaki doku arasına süspansiyonu enjekte ederek lokalize bir yara enfeksiyonu oluşturun.
Ön panodaki stromal hücreler üzerindeki örüntü tanıma reseptörleri, bakteriler üzerindeki patojenle ilişkili moleküler örüntüleri tanır. Bu bağlanma, proinflamatuar sitokinlerin ve kemoatraktanların salınmasına neden olur ve iltihaplanmaya neden olur.
Kemoatraktanlar, enfeksiyon bölgesinde dolaşım nötrofillerini işe alır. Gelen nötrofiller, bakterileri sitoplazmik granüllerle birleşen ve antimikrobiyal peptit salınımına neden olan bir fagozoma
yutar.Bir enzim kompleksi olan NADPH oksidaz, fagozom zarı üzerinde toplanır ve reaktif oksijen türleri veya ROS üretir. Antimikrobiyal peptitler ve ROS bakteriyel bozulmaya neden olur.
Bir karşı tepki olarak, bakteriler nötrofil zarına nüfuz eden ve hücre lizizine neden olan virülans faktörleri salgılar. Bakteriler ayrıca fagositozu önlemek için fibrin birikimi için enzimler salgılar.
Bağışıklık tepkisi, bakteri hücreleri, nötrofiller ve ölü hücreler içeren bir fibrin kapsülü olan bir apseye yol açar.
Bakteri-nötrofil etkileşimini görselleştirmek için nötrofil floresansını ve bakteriyel biyolüminesansını kaydedin.
Staph aureus aşılaması için, 28 gauge insülin şırıngasını hazırlanan biyolüminesan bakteri aşılayıcısından 50 mikrolitre ile doldurun ve yaralı hayvanın dermisini yana çekmek için bir parmağınızı kullanın. Şırıngayı dokuya neredeyse paralel tutarak, dirençte ani bir azalma hissedilene kadar şırıngayı yavaşça dokuya sokun, bu da fasyanın delindiğini gösterir.
İğne yaranın ortasına yerleştirildiğinde, aşılayıcının tüm hacmini yavaşça verin. Aşılayıcının yaranın merkezinde minimum sızıntı veya dağılma ile bir kabarcık oluşturduğunu onaylayın ve şırıngayı hayvandan yavaşça çıkarın. Ardından, hayvanı ısı ile kafesine geri koyun ve tamamen iyileşene kadar izleyin.