Vitronektinin konakçı epitel hücrelerine bakteri yapışmasındaki rolünü incelemek için bir test

Yapışık epitel hücre tek katmanları içeren çok kuyulu bir plaka alın. Serum protein girişimini önlemek için ortamı serumsuz ortamla değiştirin. İnkübasyon sonrası, ortamı çıkarın. Hücreleri tampon ile yıkayın. Vitronektin içeren soğutulmuş serumsuz ortam ekleyin. Daha düşük sıcaklıklarda inkübe edin.

Vitronektinin N-terminal RGD alanı, epitel hücre yüzeyi integrin reseptörlerine bağlanır. Daha düşük sıcaklıklar, vitronektin-integrin kompleksinin hücresel içselleşmesini engeller.

İntegrin reseptörü doygunluğunu takiben, ortamı çıkarın. Bakteriyel vitronektine bağımlı integrin bağlanmasını etkileyebilecek fazla vitronektini çıkarmak için tamponla yıkayın.

Haemophilus influenzae tip f veya gram negatif bir bakteriyel patojen olan Hif süspansiyonunu ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

Hif yüzeyindeki protein H, vitronektinin C-terminaline bağlanarak Hif'in epitel hücresine yapışmasını ve ardından içselleştirmeyi kolaylaştırır.

Ortamı çıkarın ve bağlanmamış Hif'i çıkarmak için tamponla yıkayın. Hücreleri toplamak için bir hücre ayırma enzimi kullanın. Enzimatik reaksiyonu durdurmak için serum içeren ortam ekleyin. Hücre süspansiyonunu cam boncuklar içeren bir cam tüpe aktarın. Hücreleri parçalam