İnsan serumunun bakterisidal aktivitesine karşı bakteriyel dirençte vitronektinin rolünün belirlenmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

0 görüntüleme • 2:55 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir insan serum glikoproteini olan vitronektinin bakteriler üzerindeki etkisini araştırmak için, Haemophilus influenzae süspansiyonu içeren tüplerle başlayın.

Bir tüpü vitronektin içeren normal insan serumu ve diğerini vitronektin tükenmiş serum ile tedavi edin. Her iki serum varyantı da bakterisidal aktivite için gerekli olan antikorlar ve çeşitli kompleman proteinleri içerir.

İnkübasyon sırasında, antikorlar bakteriyel yüzey proteinleri ile etkileşime girer ve kompleman proteinlerini aktive ederek C5'i parçalayan C5 konvertaz oluşturur. C5b, C6 ile birleşir, ardından C7 gelir ve C5b6-7 kompleksini oluşturur. Bu kompleks bakteri hücre zarına bağlanır ve C8'i işe alarak C5b67-8'i oluşturur.

Bu işlem, C9 monomerlerinin bağlanmasını ve polimerizasyonunu kolaylaştırarak, gözenek oluşturan bir yapı olan membran saldırı kompleksini oluşturur. Bu gözenekler iyon ve su akışına neden olarak bakteri lizizine yol açar.

Buna karşılık, normal serumlu tüpte vitronektin, C5b6-7 kompleksi ve C9 monomerleri ile etkileşime giren bir bakteriyel yüzey proteinine bağlanır. Bu etkileşimler, C8'in toplanmasını ve C9'un polimerizasyonunu önler, membran saldırı kompleksi oluşumunu engeller ve bakteri sağkalımına yol açar.

Bakteri süspansiyonunu hem tüplerden hem de kültürden ayrı agar plakaları üzerinde alın.

Vitronektin içeren serumdaki daha yüksek bakteri kolonileri, insan serumunun bakterisidal aktivitesine karşı bakteri direncindeki rolünü doğrular.

İnsan serumunun bakterisidal aktivitesine karşı vitronektine bağlı direncin analizini yapmak için, önce bakterileri metin protokolünde açıklandığı gibi kültürleyin ve peletleyin. Santrifüjlemeyi takiben, bakteri peletini 1 hacim dekstroz jelatin veronal tamponu ile yeniden süspanse edin. Şimdi% 5 serum içeren 100 mikrolitre DGVB ++ 'ya 1.500 CFU bakteri ekleyin.

Numuneyi 37 santigrat derecede 15 dakika boyunca 300 RPM'de çalkalayarak inkübe edin. Reaksiyon karışımından 10 dakika ve 0 dakikada 15 mikrolitrelik bir alikot çıkarın. Alikotu çikolatalı agar üzerine yerleştirin ve plakayı gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Çikolata agar plakalarının inkübasyonundan sonra, plaka üzerinde görünen kolonileri sayın ve metin protokolünde açıklandığı gibi öldürülen bakteri yüzdesini hesaplayın.

08:51

Bir uyarılabilir İfade Sistemi uygulamak Hücre içi Sinyali ile Bakteriyel Virulans Faktörler Girişim Eğitim için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:47

Opsonophagocytic öldürme tahlil bakteriyel patojenlere karşı immünolojik yanıt değerlendirmek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:23

Floresan Antibiyotik Probları Kullanılarak Bakteriyel Direncin Görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:55

Yem ve Av Proteinleri Arasındaki Etkileşimleri Analiz Etmek için ELISA Tabanlı Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:53

Vitronektinin konakçı epitel hücrelerine bakteri yapışmasındaki rolünü incelemek için bir test

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:40

Antikorların Kompleman Aracılı Bakterisidal Aktivitesi için Bir Serum Bakterisidal Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:05

Vitronektinin Bakteri Yüzeylerine Bağlanmasının Flow Sitometri Kullanılarak Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:33

İnsan Serumunda Nötralize Edici Antikor Titrelerini Ölçmek için Bir Mikronötralizasyon Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:54

Antikorların Candida tropicalis Biyofilmi Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:33

Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026