Salgılanan Embriyonik Alkalen Fosfataz Raportör Testi Kullanılarak Biyoaktif Tip-I İnterferonların Miktar Tayini

Bir test örneğinde interferon-alfa ve interferon-beta gibi biyoaktif tip-I interferonları ölçmek için, tasarlanmış raportör hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka alın. Bu hücreler, interferon-alfa ve beta ile indüklenebilir promotörün kontrolü altında salgılanan embriyonik alkalen fosfataz, SEAP, raportör geni eksprese eder.

Bilinmeyen bir tip I interferon konsantrasyonu içeren test örneğini ekleyin. Standart kontroller olarak işlev gören diğer kuyucuklara bir dizi insan tip-I interferon konsantrasyonu pipetleyin. Kuluçkaya yatmak.

Test kuyusundaki tip-I interferon, Janus kinazlarını aktive ederek belirli bir hücre yüzeyi reseptörüne bağlanır. Bu protein kinazlar, sinyal transdüserlerini ve transkripsiyon, STAT, proteinlerin aktivatörlerini fosforile eder ve bunlar dimerize olur ve spesifik bir interferon düzenleyici faktör ile bir kompleks oluşturur.

Çekirdeğe girdikten sonra, kompleks, interferon-alfa ve beta ile indüklenebilir promotördeki spesifik bir DNA dizisine bağlanır, SEAP gen transkripsiyonunu aktive eder ve ortama salgılanan SEAP enzimlerini üretir.

SEAP içeren ortamı, SEAP'a özgü bir alt tabakaya sahip çok kuyulu plaka kuyularına aktarın. SEAP, pembe alt tabakayı hidro