JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 3:52 dk • July 8th, 2025
Sistemik inflamasyonu indüklemek için - yaygın bir enflamatuar yanıt, anestezi uygulanmış bir fareyi sırt tarafı yukarı bakacak şekilde konumlandırarak başlayın. Mikobakteriyel antijen adjuvan depolarının mikobakteriyel emülsiyonunu içeren bir şırınga alın - antijen-adjuvan karışımının lokalize bir yağ rezervuarı
.Farenin epidermis ve dermis deri katmanlarını delin ve antijen adjuvan emülsiyonu kasık lenf noduna deri altına proksimal olarak enjekte edin. Enjeksiyon sonrası, depo sürekli olarak antijenleri çevreleyen dokuya salgılar ve antijenlerin bağışıklık sistemine uzun süre maruz kalmasını sağlar.
Dokudaki antijen sunan hücreler veya APC'ler, enjekte edilen mikobakteriyel antijenlerle etkileşime girer, içselleştirir ve bunları peptitlere dönüştürür. Bu peptitler daha sonra proinflamatuar sitokinlerin ve kemokinlerin salınımını tetikleyen majör histouyumluluk kompleksleri kullanılarak APC'lerin yüzeyinde sunulur.
Bu süreç lokalize inflamasyon oluşturur ve lenfatik damarların açılmasını tetikleyerek antijen taşıyan APC'ler de dahil olmak üzere bağışıklık hücrelerinin lenfatik sisteme girmesini ve kasık lenf noduna ulaşmasını sağlar.
Lenf düğümlerinde, yardımcı T hücrelerinin T hücresi reseptörleri, APC'lerin yüzeyindeki antijenlerle etkileşime girer ve aktive olur. Aktive edilmiş T hücreleri, lenfatik damarlardan geçen ve diğer çeşitli dokulara salınan proinflamatuar sitokinleri serbest bırakır.
Salınan proinflamatuar sitokinler, bağışıklık hücrelerini bu dokulara çekerek sistemik inflamasyona neden olur.
Başlamak için, sonikatör dönüştürücü ünitesinin gövdesini açın ve probu% 70 alkollü çubukla temizleyin. Ardından, sonikatörü açın ve güç kontrol düğmesini çevirerek güç ayarını 4'e ayarlayın.
Daha sonra, PBS'de Mycobacterium tuberculosis H37Ra'nın ince bir süspansiyonunu oluşturmak için, probun ucunu PBS içeren mikobakteriyel toza daldırın. Karışımı buz üzerinde 30 saniye boyunca sonikleştirin, ardından 30 saniye duraklayın ve sıvıyı ısıtmadan tozu eşit bir süspansiyona tamamen dağıtmak için toplam 5 dakika tekrarlayın. Daha sonra, karışıma 2.5 mililitre Freund'un eksik adjuvanını ekleyin ve emülsiyon diş macunu benzeri bir kıvam oluşturana kadar buz üzerinde sonikasyon işlemini tekrarlayın.
Deri altı enjeksiyon için, 1 mililitrelik bir şırıngaya 200 ila 300 mikrolitre mikobakteriyel emülsiyon yükleyin. Şırıngadaki havayı dışarı atın ve dolana kadar aralıklı ters çevirme ve vurma ile şırıngayı doldurmaya devam edin.
Daha sonra, deri altı enjeksiyonları ya kalçaların dorsal yüzeyine ya da 6 ila 10 haftalık, anestezi uygulanmış, C57Black / 6J farenin kasık lenf düğümlerinin bölgesine proksimal, bacakların ventral yüzeyine yerleştirin. Kasın nüfuz etmemesine dikkat ederek iğneyi dikkatlice yerleştirin ve deri altı boşluğuna 50 mikrolitre emülsiyon enjekte edin. Kalın emülsiyonun tam olarak enjekte edilmesini sağlamak için iğneyi hemen çıkarmayın.
Bu makale, enfeksiyon sonrası üveit modeli olarak hizmet eden, mikobakteriyel antijen-adjuvan emülsiyonu kullanılarak farelerde sistemik inflamasyonun indüksiyonunu göstermektedir. Protokol; antijen emülsiyonunun hazırlanmasını, lenf nodları yakınına yapılan deri altı enjeksiyonu ve bunun sonucunda yaygın inflamasyona yol açan immün aktivasyonu detaylandırmaktadır. Bu model, araştırmacıların enfeksiyon sonrası üveitin altında yatan immün mekanizmaları incelemesine olanak tanır.
Miykobakteriyel antijen-adjuvan depolarının deri altına enjeksiyonu yoluyla fare modellerinde sistemik inflamasyon indüklemek, enfeksiyon sonrası inflamatuar hastalıklarla ilgili immün aktivasyon yollarının kontrollü bir şekilde sorgulanmasına olanak tanır. Bu yaklaşım, immün hücre göçünün, sitokin salınımının ve sistemik inflamatuar yanıtların değerlendirilmesi için tekrarlanabilir bir platform sağlayarak, immünoloji odaklı ilaç keşfi süreçlerinde erken aşama hedef doğrulamayı ve mekanistik risk azaltmayı destekler. Modelin enfeksiyon sonrası üveit ile olan translasyonel ilişkisi, portföy önceliklendirme ve preklinik aday değerlendirmesi için değerini artırmaktadır.
Bu fare inflamasyon modeli, erken dönem immün yolak doğrulamasını translasyonel aday değerlendirmesiyle birleştirerek, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece entegre olur.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026