JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:06 dk. • July 8th, 2025
Raportör lusiferaz enzimini eksprese eden zayıflatılmış Mycobacterium bovis'in genetik olarak değiştirilmiş bir biyolüminesan türü olan Mycobacterium bovis BCG lux'un buzu çözülmüş bir kültürüyle başlayın.
Süspansiyonu, antibiyotik higromisin takviyeli büyüme ortamını içeren bir kültür şişesine aşılayın. Kuluçkaya yatmak. BCG lux, higromisine dirençli geni barındırarak hayatta kalmasını ve büyümesini kolaylaştırır.
İnkübasyon sonrası, luminometre tüplerinde bir tampon kullanarak uygun kültür seyreltmelerini hazırlayın. Uzun zincirli bir alifatik aldehit substrat çözeltisi ile yüklenmiş luminometreye aktarın. Çalışma sırasında aldehit, hücrelere giren mikobakteriyel süspansiyona enjekte edilir.
Bakteriyel lusiferaz, endojen indirgenmiş flavin mononükleotidi ve aldehitin oksidasyonunu katalize ederek mavi-yeşil ışık emisyonuna neden olur. Ölçülen biyolüminesans yoğunluğu, BCG lux'ün metabolik aktivitesini gösterir ve canlı bakteri veya koloni oluşturan birimlerin, CFU'nun ölçümü ile ilişkilidir.
Ardından, kalan mikobakteri kültürünü santrifüjleyin. Mikobakteriyel topaklanmayı önlemek için mikobakteriyel peleti iyonik olmayan bir yüzey aktif madde içeren bir tampon içinde yeniden süsp
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin