JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:23 dk. • July 8th, 2025
İn vivo bakteri yükünü ölçmek için, Bacillus Calmette-Guérin veya BCG lux ile önceden enfekte olmuş sterilize edilmiş böcek larvaları ile başlayın. BCG lux, biyolüminesans üreten bir enzim olan lusiferazı eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş bir Mycobacterium bovis BCG türüdür.
Bir böcek larvasını çelik bilyeli tampon içeren bir parçalama matrisi tüpüne aktarın. Bir homojenizatör kullanarak larvaları homojenize edin ve bakteriler de dahil olmak üzere hücre içi bileşenleri tampona bırakın.
Homojenatı toplamak için tüpü santrifüjleyin ve bir luminometre tüpüne aktarın.
Hücresel parçaları çözündürmek ve artık bakterileri serbest bırakmak için matris tüpünü deterjan içeren bir tamponla yıkayın.
Fraksiyonları aynı luminometre tüpünde birleştirin ve lusiferaz substratını ekleyin. Substratlar bakterilere girer ve lusiferaz enzimleri ile etkileşime girerek biyolüminesans ile sonuçlanır. Tüpü bir luminometreye yükleyin ve biyolüminesansı ölçün.
Luminometre, yayılan ışığın yoğunluğunu ölçer ve bir böcek larvasında BCG'nin in vivo yükünün göstergesi olan bağıl ışık birimini veya RLU'yu hesaplar.
Seyreltilmiş homojenat süspansiyonu piperasilin içeren bir agar plakası üzerine yayın ve BCG
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin