Farelerde Kontrollü Helicobacter Enfeksiyonu için İntragastrik Gavaj Tekniği

Bir Helicobacter pylori enfeksiyon modeli oluşturmak için, anestezi uygulanmış, patojen içermeyen bir fare ile başlayın. İşlem sırasında hareketi en aza indirmek için fareyi sıkıca tutun.

Bakteriyel süspansiyon ile doldurulmuş bir şırınga alın. İntragastrik gavaj için şırınganın iğnesine bir polietilen kateter bağlayın - süspansiyonu doğrudan mideye verme tekniği.

Ağzı mideye bağlayan kaslı bir tüp olan yemek borusuna erişmek için kateteri açık ağzın ortasına yerleştirin. Kateteri mideye ulaşana kadar yemek borusundan nazikçe yönlendirin ve bakteri süspansiyonunu doğrudan asidik ortamına verin.

Aşılanan bakteriler, üreyi amonyak ve karbondioksite dönüştüren bir enzim olan üreaz salgılar. Amonyak midenin pH'ını yükselterek asitliği nötralize eder ve bakterilerin hayatta kalmasını sağlar.

Bu bakteriler, koruyucu mukus tabakasından geçmek için kamçılarını kullanır ve mide epiteline ulaşmalarına izin verir ve burada adhesin proteinleri kullanarak hücrelere yapışırlar. Bağlandıktan sonra, bu bakteriler epitel hücreleri arasındaki sıkı bağlantıları bozan virülans faktörlerini serbest bırakır.

Bu yapısal bozulma, daha derin dokularda bakteri istilasını ve kolonizasyonunu teşvik eder ve sonuçta midede kontrollü bir enfeksiyon oluşturur.

15 mililitrelik polistiren tüplere bakteri süspansiyonları ekleyin ve her kültürden 10 ila 20 mikrolitrelik bir damlacığı ayrı cam mikroskop slaytlarına aktarmak için plastik bir halka kullanın. Ardından, faz kontrast mikroskobu altında bakterilerin canlılığını ve hareketliliğini 100 kat büyütmede değerlendirin.

H. pylori inocula'yı yalnızca bakterilerin çoğunluğu basiller şekline sahipse kullanın. H. felis inocula öncelikle sarmal şekilli bakteriler içermeli ve inokula tek kullanımlık 1 mililitrelik şırıngalara yüklenmelidir. Her şırıngayı 23 gauge bir iğne ile donatın ve her iğneye tek kullanımlık bir polietilen kateter takmak için plastik parafin film kullanın.

Daha sonra, 6 ila 8 haftalık spesifik patojen içermeyen ve Helicobacter içermeyen bir fareyi boynun ve kuyruğun tırnağından manuel olarak kısıtlayın ve açık çenenin ortasına bir kateter yerleştirin. Kateteri yemek borusuna doğru kaudal yönde yönlendirin, farenin boynunu yemek borusundan mideye erişim kolaylığı sağlamak için uzatın ve kateterin çoğu veya tamamı artık görünmeyene ve bir direnç hissedilene kadar trakeadan uzağa uzatın. Ardından, hastalık patolojisinde optimal bir kolonizasyon sağlamak için en az 1 x 10⁵ bakteri verin.