Enfekte Bir Fare Midesinde Helicobacter pylori Yükünün Miktarının Belirlenmesi

Enfekte bir fare midesinde Helicobacter pylori kolonizasyonunu ölçmek için, bakteriyel canlılığı desteklemek için besin ortamında süspanse edilen vücut ve antrum bölgelerini içeren düzleştirilmiş mide dokusu ile başlayın.

Mide dokusunu mukus tabakası ile parçalamak için homojenize edin ve Helicobacter pylori'yi dokudan ortama salın. Elde edilen mide homojenatının ortam kullanarak seri dilüsyonlarını gerçekleştirin.

Birden fazla segmente ayrılmış kurutulmuş at kanı agar, HBA, plakalar elde edin. HBA plakaları bir antibiyotik karışımı ile desteklenir. Her bir homojenat seyreltmesini plakanın ayrı bölümlerine aktarın ve eşit şekilde yayın.

Kurutma sonrası, plakaları özel gaz karışımları içeren nemlendirilmiş bir anaerobik kültür kavanozu içinde ters konuma yerleştirin. Kuluçkaya yatmak.

Anaerobik kültür kavanozunun HBA besinleri ile birlikte sağladığı mikroaerofilik ortam, Helicobacter pylori'nin büyümesini ve koloniler oluşturmasını kolaylaştırır. HBA'daki antibiyotikler, endojen mide mikrobiyotasından bakteri türlerinin büyümesini engeller.

Belirli bir sayılabilir aralıkta kalan HBA plaka segmentlerindeki Helicobacter pylori kolonilerini sayın.

Mide dokusundaki Helicobacter pylori yükünü hesaplayın, bu da doku içindeki bakteri kolonizasyonunun derecesini gösterir.

Enfeksiyon sonrası midedeki canlı H. pylori sayısını saymak için, BHI'da saklanan mide örneklerini homojenize edin ve elde edilen mide homojenatlarının taze steril et suyunda çift seri seyreltmelerini gerçekleştirin.

Ek antibiyotiklerle takviye edilmiş önceden kurutulmuş at kanı agarını veya HBA plakalarını üç veya dört segmente bölün ve Miles ve Misra tekniğinin bir uyarlamasını kullanarak, her agar plakasının bir segmentine her mide homojenat seyreltmesinden 10 ila 100 mikrolitre ekleyin. Homojenatları steril plastik halkalarla yayın ve plakaların kurumasını bekleyin. Ardından, plakaları bir Petri kabı su ve bir gaz paketi içeren anaerobik gaz kavanozlarına ters bir konuma yerleştirin, ardından kavanozları dört ila yedi gün boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.

Koloniler gözlemlenebildiğinde, 10 ila 100 izole koloni içeren segmentleri numaralandırın.