Üropatojenik E. coli ile Enfekte Fare Mesane Dokusunda Akış Sitometrisi Kullanılarak İmmün Hücre İnfiltrasyonunun Ölçülmesi

0 views • 3:43 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Üropatojenik E. coli ile enfekte fare mesane dokusunda bağışıklık hücresi infiltrasyonunu ölçmek için, kıyılmış dokuyu kollajenaz ve deoksiribonükleaz içeren bir sindirim tamponuna yerleştirin.

Dokuyu bozmak için düzenli çalkalama ile inkübe edin.

Kollajenaz, dokunun hücre dışı matrisini sindirerek hücreleri serbest bırakır. Deoksiribonükleaz, enterferans yapan serbest DNA'yı bozar.

İnkübasyon sonrası, sindirim enzimlerini etkisiz hale getirmek için bir şelatlama maddesi ve fetal sığır serumu ile tampon ekleyin.

Doku kalıntılarını ve bağ dokusunu çıkarmak için sindirilmiş karışımı bir süzgeçten geçirin ve tek hücreli bir süspansiyon elde edin.

Hücreleri Fc bloke edici antikorlar içeren bir tamponda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin. Bu antikorlar, spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bağışıklık hücresi Fc reseptörlerine bağlanır.

Bağışıklık hücreleri üzerindeki transmembran CD45 proteinine bağlanan florofor etiketli anti-CD45 antikorları ekleyin.

Hücre agregalarını çıkarmak için yeniden askıya alınan hücreleri santrifüjleyin ve bir hücre süzgecinden geçirin.

Bir akış sitometresi kullanarak, mesanedeki bağışıklık hücresi infiltrasyonunu ölçmek için bağışıklık hücreleri üzerindeki florofor konjuge antikorlardan gelen floresan sinyallerini ölçün.

Mesane dokusu üzerinde akış sitometrisi yapmak için, mesaneyi gösterildiği gibi izole ettikten sonra, dokuyu iyice kıymak için makas kullanın. Sindirim tamponu içeren tüp başına 1 kıyılmış mesane ekleyin, ardından kıyılmış dokuyu sindirim tamponunda yıkamak için tüpü sallayın ve tüm mesaneler diseke ve kıyma yapılana kadar buz üzerinde tutun. Kıyılmış mesaneleri 37 santigrat derecede 60 ila 75 dakika boyunca inkübe edin ve her 15 dakikada bir 5 saniye boyunca elle kuvvetlice sallayın.

Doku, ıslak kağıt mendili andıran camsı, şeffaf bir görünüme sahip olduğunda sindirim tamamlanmıştır. 2 ila 3 mililitre buz gibi soğuk akış sitometri tamponu ekleyerek sindirim enzimlerini etkisiz hale getirin ve yavaşça karıştırın. Ardından tüpleri buzun üzerine yerleştirin.

Tek hücreli bir süspansiyon sağlamak ve herhangi bir bağ dokusunu çıkarmak için, tüpün içeriğini 15 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirilmiş 100 mikrometrelik bir filtreden geçirin. Ardından, bir şırınga pistonunun ucuyla, kalan dokuyu filtreden hafifçe bastırın. Filtreyi ek 2 mililitre akış sitometrisi tamponu ile yıkayın ve numuneleri buz üzerinde tutun. Daha sonra numuneleri 4 santigrat derecede 200 kez g santrifüjleme ile 7 dakika yıkayın.

Pelet, mililitre başına 5 mikrograma seyreltilmiş Fc bloğu içeren 100 mikrolitre akış sitometri tamponunda yeniden süspanse edin ve 96 oyuklu yuvarlak tabanlı bir plakaya aktarın. 10 ila 15 dakika sonra, her numuneye 100 mikrolitre istenen antikor kokteyli ekleyin. Daha sonra, numuneleri ışıktan korunarak buz üzerinde 30 ila 45 dakika inkübe edin. Numuneleri 4 santigrat derecede 200 kez g santrifüjleme ile 7 dakika yıkayın.

Son olarak, hücre peletlerini 200 mikrolitre akış sitometrisi tamponunda yeniden süspanse edin ve numuneleri bir akış sitometresinde edinimden hemen önce 5 mililitrelik bir polistiren tüp üzerinde 40 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin.

10:19

B Grubu bir murin modelinde Streptococcus Vajinal Kolonizasyon

Related Videos

0 Views

04:01

Yetişkin erkek fare yordamda transüretral korumak

Related Videos

0 Views

07:34

İdrar yolu enfeksiyonu aşağı akım tek hücreli analiz için bir fare modelinden oluşturulan tek hücre içi bakteriyel toplulukların yalıtım

Related Videos

0 Views

09:24

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Related Videos

0 Views

05:23

Bakteriyel Enfeksiyonun Görselleştirilmesi İçin Fare Mesanesi Dokusu Hazırlanması

Related Videos

0 Views

02:06

Enfekte Bir Fare Mesanesindeki Hücre İçi Bakteri Topluluklarının Görselleştirilmesi

Related Videos

0 Views

02:32

Erkek Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Oluşturmak için Transüretral Kateterizasyon ve Bakteriyel Aşılama

Related Videos

0 Views

11:20

Bir kültür Mesane EPİTELİ karşısında İnsan Nötrofil Göç Kantitatif Değerlendirilmesi

Related Videos

0 Views

08:40

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Related Videos

0 Views

10:23

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Related Videos

0 Views

Last updated: 1 August 2026