Üropatojenik E. coli ile Enfekte Fare Mesane Dokusunda Akış Sitometrisi Kullanılarak İmmün Hücre İnfiltrasyonunun Ölçülmesi

Üropatojenik E. coli ile enfekte fare mesane dokusunda bağışıklık hücresi infiltrasyonunu ölçmek için, kıyılmış dokuyu kollajenaz ve deoksiribonükleaz içeren bir sindirim tamponuna yerleştirin.

Dokuyu bozmak için düzenli çalkalama ile inkübe edin.

Kollajenaz, dokunun hücre dışı matrisini sindirerek hücreleri serbest bırakır. Deoksiribonükleaz, enterferans yapan serbest DNA'yı bozar.

İnkübasyon sonrası, sindirim enzimlerini etkisiz hale getirmek için bir şelatlama maddesi ve fetal sığır serumu ile tampon ekleyin.

Doku kalıntılarını ve bağ dokusunu çıkarmak için sindirilmiş karışımı bir süzgeçten geçirin ve tek hücreli bir süspansiyon elde edin.

Hücreleri Fc bloke edici antikorlar içeren bir tamponda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin. Bu antikorlar, spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bağışıklık hücresi Fc reseptörlerine bağlanır.

Bağışıklık hücreleri üzerindeki transmembran CD45 proteinine bağlanan florofor etiketli anti-CD45 antikorları ekleyin.

Hücre agregalarını çıkarmak için yeniden askıya alınan hücreleri santrifüjleyin ve bir hücre süzgecinden geçirin.

Bir akış sitometresi kullanarak, mesanedeki bağışıklık hücresi infiltrasyonunu ölçmek için bağışıklık hüc