JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:49 dk • July 8th, 2025
İnsan periferik kan mononükleer hücreleri veya bir insan immün yetmezlik virüsünden veya HIV ile enfekte donörden türetilen PBMC'leri içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
PBMC'ler, entegre proviral DNA'ya sahip HIV ile enfekte CD4 pozitif T hücreleri dahil olmak üzere çeşitli bağışıklık hücreleri içerir.
Kuyucukları Plasmodium falciparum parazitlenmiş eritrositler veya PfRBC'ler - parazit türevi antijenleri ve enfekte olmamış RBC'leri ifade eden bir karışımla tohumlayın.
İnkübasyon sırasında, PfRBC'lerin antijenleri, bağışıklık hücrelerinin reseptörleri ile etkileşime girerek onları aktive eder ve sitokinleri serbest bırakır.
Bu sitokinler, CD4 T hücrelerinde aşağı akış sinyalini tetikleyerek HIV proviral DNA'sının transkripsiyonunu ve yeni viral RNA'ların sentezini başlatır.
Viral RNA'lar ve HIV proteinleri, tomurcuklanan, yeni CD4 T hücrelerini enfekte eden ve HIV enfeksiyonunu yayan virüs parçacıkları oluşturur.
İlerleyici HIV enfeksiyonu sitokin sekresyonunu bozarak PfRBC'lere karşı bağışıklık tepkisini bozar ve kalıcı sıtma enfeksiyonuna yol açar.
Zamanla, enfekte olmuş eritrositler, yeni eritrositleri istila eden, sıtma parazitlerini çoğaltan ve sıtma-HIV ko-enfeksiyon hücre kültürü modelini oluşturan parazitleri serbest bırakır.
Ko-enfeksiyon kültürlerini kurmak için, 24 oyuklu bir plakaya 100 mikrolitre RPMI-S + içinde 1 x 106 taze izole edilmiş HIV pozitif ve HIV negatif PBMC tohumlayarak başlayın. 400 mikrolitre RPMI-S+ ile her kuyucuğun toplam hacmini 500 mikrolitreye çıkarın.
Daha sonra, üç kopya halinde ve oyuk başına toplam 500 mikrolitre hacimde, HIV ile enfekte olmuş ve HIV ile enfekte olmamış hücrelere 3 x 106 enfekte olmamış kırmızı kan hücresi veya 3 x 106 parazitli kırmızı kan hücresi ekleyin. Ko-enfeksiyon plakasını bir hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin.
Daha sonra, uygun deneysel zaman periyodundan sonra, hücreleri peletleyin ve her oyuktan 700 mikrolitre kültür süpernatanı toplayın. Herhangi bir kalıntıyı temizlemek için süpernatanı santrifüjleyin. Ardından, numuneleri uygun şekilde aliquot; tüpleri etiketleyin ve daha sonra analiz etmek için eksi 20 santigrat derece veya altında dondurun.