JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:33 dk • July 8th, 2025
Bir insan bağırsak organoid kültürünü ele alalım. Organoidler, in vivo mimariyi taklit eden, merkezi lümene bakan epitel hücrelerinden oluşur.
Bir parazit olan Cryptosporidium parvum'un hilal şeklindeki sporozoitlerini (enfektif formu) içeren bir mikroenjektör alın.
Sporozoitleri organoid lümene enjekte edin.
Parazit lektinleri, epitel hücreleri üzerindeki spesifik karbonhidratlara bağlanarak parazitoforlu bir vakuole girişlerini kolaylaştırır.
İçselleştirilmiş parazit, besinleri alan ve eşeysiz üremeye uğrayan ve istilacı form olan merozoitleri içeren tip I meront oluşturmak için eşeysiz üremeye uğrayan bir trofozoite - beslenme aşamasına dönüşür.
Serbest bırakılan merozoitler, komşu epitel hücrelerini enfekte eder ve merozoitler içeren tip II merontlar geliştirir.
Merozoitler komşu hücrelere girer ve mikrogamont veya makrogamont - erkek ve dişi üreme aşamalarına farklılaşır.
Mikrogamont, vakuolün dışına salınan mikrogametler oluşturmak için bölünmeye uğrar.
Bir mikrogamet, makrogamontu dölleyerek bir zigot üretir.
Zigot, sporozoit içeren bir ookist oluşturan bölünmeye uğrar. Serbest bırakıldıktan sonra, sporozoitler enfeksiyon döngüsünü tekrarlar.
Enfeksiyon ilerlemesini değerlendirmek için organoidleri hasat edin.
Parazitleri bir 3D organoidin apikal tarafına mikroenjekte etmek için, önce cam enjeksiyon kılcal damarlarını hazırlamak için bir mikropipet çektirmesi kullanın. Kılcal damarın ucunu 9 ila 12 mikrometre çapında kesmek için forseps kullanın, sporozoitlerin veya ookistleri doğrudan enjekte etmeyi seçerseniz ookistlerin kolay akışını sağlayın ve her kılcal damarı hızlı bir yeşil boya etiketli ookist veya sporozoit süspansiyonu ile doldurmak için mikro yükleyici uçları kullanın.
Daha sonra, ilk sporozoit dolu kılcal damarı bir mikroenjektöre yükleyin ve her bir organoide 100 ila 200 nanolitre süspansiyonu mikroenjekte etmek için 5x büyütme ve sabit bir basınçta ters çevrilmiş bir mikroskop kullanın.