JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:37 dk. • July 8th, 2025
Enfeksiyon sırasında, alveolar makrofajlar, patojenleri ortadan kaldırmak için makrofaj hücre dışı tuzaklar veya MET'ler salgılar.
MET'ler, peptidil arginin deiminazlar, PAD'ler, matris metalloproteinazlar ve sitrülinli histonlar ile komplekslenmiş kromatin liflerinden oluşur.
Bronkoalveoler lavaj sıvısından makrofajlardaki MET'leri görselleştirmek için önce sıvıyı santrifüjleyin.
Yeniden askıya alınan hücreleri, çok kuyulu plaka kuyucukları içindeki lameller üzerine yerleştirin.
Makrofajlar lamellere yapışırken, diğer hücreler askıda kalır ve atılır.
Hücresel yapıyı koruyarak makrofajları düzeltin. Hücresel hedeflere erişmek için onları geçirgen hale getirin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önleyen bloke edici proteinler ekleyin.
Sırasıyla sitrüline histonları, PAD'leri ve matris metalloproteinazları hedef alan bir birincil antikor kokteyli ile takviye edin.
Hedef MET proteinine bağlı birincil antikorlara bağlanan farklı florofor etiketli ikincil antikorlar ekleyin.
Hücreleri DAPI içeren montaj ortamı ile monte edin. Floresan bir boya olan DAPI, kromatin liflerini lekeler.
Konfokal bir mikroskop kullanarak, sitrüline histonlar, PAD'ler ve metalloproteinazlar içeren floresan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin