JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:26 dk. • July 8th, 2025
Altta yatan epidermisi açığa çıkaran, küçük yaraları olan bir pirinç yaprağı içeren bir kültür kabı ile başlayın.
Mantar büyümesi için elverişli bir ortam yaratan Tween-20 içeren bir nemlendirme solüsyonu uygulayın.
Yaralı bölgenin üzerine conidia - üreme mantar sporları içeren konidioforlardan oluşan misel bir Magnaporthe grisea tıkaç yerleştirin.
Mantar büyümesini teşvik etmek için yaprağı fotoperiyot koşulları altında nemli bir odada inkübe edin.
Kuluçka sırasında, konidioforlar, maruz kalan epidermise yapışan ve germ tüpleri geliştiren sporları serbest bırakır.
Germ tüpü, yüksek turgor basıncı oluşturan ve keskin bir hif veya penetrasyon peg'i oluşturan kubbe şeklinde bir appressorium'a farklılaşır.
Penetrasyon peg, hücre duvarını parçalayan enzimleri salgılayarak epidermal hücreye girişini ve besin alımı için invaziv hiflere farklılaşmasını kolaylaştırır.
Bu hifler, epidermal hücreler içinde plazmodesmata yoluyla büyür ve yayılır - hücreler arasındaki kanalları birbirine bağlar ve enfeksiyonu oluşturur.
Mantar toksinler salgılayarak yapraklarda yaralı bölgenin yakınında hücre nekrozuna ve lezyon oluşumuna neden olarak mantar enfeksiyonuna işaret eder.
Anatomik bir iğne kullanarak, ayrılmış pirinç yapraklarının ana damarlarında 2 ila 3 santimetre uzunluğunda üç yara kazıyın. Kazınmış yaprakları kürdan üzerine koyun ve üzerlerine Tween-20 solüsyonu püskürtün. Daha sonra, her bir M griseus suşunu içeren OTA plakalarından 1/2 x 1/2 santimetrelik bir misel tıkaç kesin. Tıkaçları yaralı yaprakların üzerine yerleştirin ve 3 ila 8 gün boyunca 25 santigrat derecede nemli bir odada inkübe edin.
Kuluçka döneminden sonra lezyonları Uluslararası Pirinç Araştırma Enstitüsü tarafından sağlanan skorlama sistemine göre inceleyin ve değerlendirin. Son olarak, test edilen suşların bulaşıcılığını değerlendirmek için hastalıklı yaprakların fotoğrafını çekin.