Name: Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Öğrenin, servikal ventral hornu hedefleyen intraspinal sinir öncüsü hücre transplantasyonu protokolünü. Fare ve sıçan modellerinde ALS ve spinal kord yaralanması için motor nöron koruma yöntemini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ben teşekkür etmek istiyorum: Lepore tüm üyeleri, Maragakis ve yararlı tartışma için Rothstein laboratuvarları; Amerika ve finansman için Craig H. Neilsen Vakfı Felçli Gaziler.

<ol><li>Lane, M. A., Fuller, D. D., White, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Trends in neurosciences. 31, 538-538 (2008).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chest.+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin. Chest. Med. 15, 675-675 (1994).</li>
<li>Miller, R. G., Rosenberg, J. A., Gelinas, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practice+parameter%3A+the+care+of+the+patient+with+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28an+evidence-based+review%29%3A+report+of+the+Quality+Standards+Subcommittee+of+the+American+Academy+of+Neurology%3A+ALS+Practice+Parameters+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Practice parameter: the care of the patient with amyotrophic lateral sclerosis (an evidence-based review): report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology: ALS Practice Parameters Task Force.</a> Neurology. 52, 1311-1323 (1999).</li>
<li>Mitsumoto, H., Chad, D. A., Pioro, E. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMitsumoto%2C+H+%22Amyotrophic+lateral+sclerosis%22">Amyotrophic lateral sclerosis</a>. Davis, F. A. , Philadelphia. (1998).</li>
<li>Tandan, R., Bradley, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyotrophic+leteral+sclerosis%3A+Part+2.+Etiopathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Amyotrophic leteral sclerosis: Part 2. Etiopathogenesis.</a> Annals of neurology. 18, 419-419 (1985).</li>
<li>Bruijn, L. I., Miller, T. M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+mechanisms+involved+in+motor+neuron+degeneration+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unraveling the mechanisms involved in motor neuron degeneration in ALS.</a> Annu Rev Neurosci. 27, 723-723 (2004).</li>
<li>Rosen, D. R., Siddique, T., Patterson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362, 59-59 (1993).</li>
<li>Bruijn, L. I., Becher, M. W., Lee, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-327 (1997).</li>
<li>Gurney, M. E., Pu, H., Chiu, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264, 1772-1775 (1994).</li>
<li>Howland, D. S., Liu, J., She, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+loss+of+the+glutamate+transporter+EAAT2+in+a+transgenic+rat+model+of+SOD1+mutant-mediated+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Focal loss of the glutamate transporter EAAT2 in a transgenic rat model of SOD1 mutant-mediated amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Proc Natl Acad Sci. 99, 1604-1604 (2002).</li>
<li>Nagai, M., Aoki, M., Miyoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats+expressing+human+cytosolic+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenes+with+amyotrophic+lateral+sclerosis%3A+associated+mutations+develop+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rats expressing human cytosolic copper-zinc superoxide dismutase transgenes with amyotrophic lateral sclerosis: associated mutations develop motor neuron disease.</a> J. Neurosci. 21, 9246-9246 (2001).</li>
<li>McDonald, W., Becker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury%3A+promising+interventions+and+realistic+goals%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Phys.+Med.+Rehabi%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury: promising interventions and realistic goals.</a> Am. J. Phys. Med. Rehabi. I82, S38-S38 (2003).</li>
<li>Sandrow-Feinberg, H. R., Zhukareva, V., Santi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEGylated+interferon-beta+modulates+the+acute+inflammatory+response+and+recovery+when+combined+with+forced+exercise+following+cervical+spinal+contusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">PEGylated interferon-beta modulates the acute inflammatory response and recovery when combined with forced exercise following cervical spinal contusion injury.</a> Experimental neurology. 223, 439-451 (2010).</li>
<li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287, 1433-1433 (2000).</li>
<li>Lane, M. A., Lee, K. Z., Fuller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+circuitry+and+respiratory+recovery+following+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+physiology+%26+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Spinal circuitry and respiratory recovery following spinal cord injury.</a> Respiratory physiology & neurobiology. 169, 123-123 (2009).</li>
<li>Lepore, A. C., Rauck, B., Dejea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature. 11, 1294-1294 (2008).</li>
<li>Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+and+Restricted+Precursors+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Multipotent and Restricted Precursors in the Central Nervous System.</a> Anat Rec. 257, 137-137 (1999).</li>
<li>Rao, M. S., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial-+restricted+precursors+are+derived+from+multipotent+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Glial- restricted precursors are derived from multipotent neuroepithelial stem cells.</a> Dev Biol. 188, 48-48 (1997).</li>
<li>Suzuki, M., Tork, C., Shelley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS.+Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS. Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 8, 20-20 (2007).</li>
<li>Lepore, A. C., Haenggeli, C., Gasmi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+spinal+cord+delivery+of+adeno-associated+virus+IGF-1+is+protective+in+the+SOD1G93A+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal spinal cord delivery of adeno-associated virus IGF-1 is protective in the SOD1G93A model of ALS.</a> Brain research. 1185, 256-256 (2007).</li>
<li>Veldink, J. H., Bar, P. R., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differences+in+onset+of+disease+and+response+to+exercise+in+a+transgenic+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Sexual differences in onset of disease and response to exercise in a transgenic model of ALS.</a> Neuromuscul Disord. 13, 737-737 (2003).</li>
<li>Shumsky, J. S., Lepore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Neuronal+and+Glial+Restricted+Precursors+into+Contused+Spinal+Cord+Improves+Bladder+and+Motor+Functions%2C+Decreases+Thermal+Hypersensitivity%2C+and+Modifies+Intraspinal+Circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Neuronal and Glial Restricted Precursors into Contused Spinal Cord Improves Bladder and Motor Functions, Decreases Thermal Hypersensitivity, and Modifies Intraspinal Circuitry.</a> J. Neurosci. 25, 9624-9624 (2005).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

SOD1 G93A fareler ve sıçanlar, yaş ve bir grup içinde hayvanların seks maç ve farklı gruplar için aynı çöp içinde hayvan dağıtmak. Içeren çalışmalar için Bu hastalık süreçleri kadın ve erkekler arasında farklılık gösterebilir, çünkü ALS ve SKY modellerin her ikisi için de aynı cinsiyetten tüm hayvanları kullanmak için tercih edilir, ancak, aynı zamanda her iki cinsiyetten yeterli hayvanlar olmak mümkün cinsiyete özgü etkilerini tespit etmek için yararlı olabilir gibi Bu fenomenin SOD1 G93A sıçanlar...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> 0.05% tripsin </td><td> Gibco </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Soya tripsin inhibitörü (isteğe bağlı) </td><td> Sigma </td><td> T-6522 </td></tr><tr><td> Acepromazine maleat (0.7 mg / kg) </td><td> Fermantasyon Hayvan Sağlığı </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin (95 mg / kg) </td><td> Fort Dodge Hayvan Sağlığı </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine (10 mg / kg) </td><td> Bayer </td><td></td></tr><tr><td> # 11 Feather cerrahi bıçak </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimler </td><td> 72044-11 </td></tr><tr><td> Pamuk uçlu aplikatörler (6 inç) </td><td> Balıkçı </td><td> 23-400-101 </td></tr><tr><td> Rat-dişli forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> Sıçan: 11.023-15; Fare: 11.042-08 </td></tr><tr><td> Orta ölçekli yaylı makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15012-12 </td></tr><tr><td> Mini yaylı makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15000-10 </td></tr><tr><td> Rongeur </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> Sıçan: 16.121-14; Fare: 16.221-14 </td></tr><tr><td> Microknife </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10056-12 </td></tr><tr><td> Iğnelikler </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 12502-14 </td></tr><tr><td> Sütür: 4-0 </td><td> Vicryl </td><td> S-183 </td></tr><tr><td> Staples: 9 mm </td><td> AutoCLIP </td><td> 427631 </td></tr><tr><td> Zımba: 9 mm (Refleks # 203-1000) </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 5000344 </td></tr><tr><td> Sıcak su pompası (T / Pompa) </td><td> Gaymar </td><td> P / N 07999-000 </td></tr><tr><td> Siklosporin A: 250.0 mg/5.0 ml ampul </td><td> Novartis / Sandimmune </td><td> NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FK-506 </td><td> LC Laboratuvarları </td><td> F-4900 </td></tr><tr><td> Rapamisin </td><td> LC Laboratuvarları </td><td> R-5000 </td></tr><tr><td> Enjektör </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> UMP2 </td></tr><tr><td> Micro 4 mikroenjektör Pompa Kontrolörü </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> UMC4 </td></tr><tr><td> Mikromanipülatör </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> Kite-R </td></tr><tr><td> 10.0 mcL Hamilton şırınga </td><td> Hamilton </td><td> 80030 </td></tr><tr><td> Hamilton: 33-gauge iğne, 45 ° eğim, 1 inç </td><td> Hamilton </td><td> 7803-05 </td></tr><tr><td> Cam 20.0 mcL microcapillary pipetler (isteğe bağlı) </td><td> Kimble </td><td> 71900-20 </td></tr></tbody></table>

amyotrophic lateral sclerosis ve travmatik spinal kord yaralanması servikal ventral horn hedefleme intraspinal hücre transplantasyonu

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Frenik motor nöron kaybına bağlı olarak solunum yetmezliği, insan travmatik omurilik yaralanması büyük bir kısmı (SCI) olguda 1 bir zayıflatıcı bir sonucudur ve nihai motor nöron bozukluğu, amiyotrofik lateraller skleroz (ALS) 2 olan hastalarda ölüm sebebidir. ALS, üst nispeten hızlı bir dejenerasyon ve alt motor nöronlar ile karakterizedir yıkıcı bir nörolojik bozukluktur. Ortalama 2-5 yıl hastalık nihayetinde yenik hastalar diyafram 3 frenik motor nöron innnervation kaybı nedeniyle solunum felci tanısı. % 10 ailesel formu ise vakaların büyük bir çoğunluğu, sporadik. Ailesel vakaların yaklaşık yüzde yirmi Cu / Zn süperoksit dismutaz 1 (SOD1) gen, kromozom 21 4 üzerindeki çeşitli nokta mutasyonlarının bağlantılıdır . Mutant insan SOD1 genler (G93A, G37R, G86R, G85R) taşıyan transgenik farelerin 4,5 ve sıçanlarda 6 üretilen ve motor nöron kaybı diğer hayvan modelleri varlığına rağmen, şu anda hastalığın en çok kullanılan modeller var . Spinal kord yaralanması (SCI), yaralanma 7 tipi, yeri ve şiddetine göre değişen koşulları, fiziksel travma, omurilik çıkan fonksiyonel sonuç ile heterojen bir set . Bununla birlikte, insan SKY vakalarının yaklaşık yarısı frenik motor nöron kaybı ve yaralanma bulbospinal solunum aksonları 1 inen zayıflatıcı solunum fonksiyon bozukluğu nedeniyle, servikal bölgeleri etkiler . SCI hayvan modellerinde bir dizi en yaygın olarak kullanılan ve klinik olarak ilgili kontüzyon 8 ile geliştirilmiştir. Nöral prekürsör hücreler (NPC) çeşitli sınıflar Nakli nöro kayıp ya da işlevsiz MSS hücre tipleri, sağlamak yerine, gen faktörler sunmak için yeteneği nedeniyle, ALS ve SCI de dahil olmak üzere, travmatik CNS yaralanmalar ve nörodejenerasyon, tedavisi için umut verici bir tedavi stratejisi ilgi 9. ALS ve SKY hem de hayvan modelleri, frenik motor nöron kaybı ve buna bağlı olarak solunum uzlaşma 10,11 dahil olmak üzere, bu hastalıkların pek çok klinik ilgili yönlerini, model olabilir. ALS ve SCI bu hayvan modellerinde solunum fonksiyon NPC tabanlı stratejilerin etkinliğini değerlendirmek için, hücresel müdahaleler özellikle frenik motor nöronlar gibi terapötik ilgili hedefler içeren bölgeler olmalıdır. Biz SOD1 G93A fareler ve sıçanlar, yanı sıra omurilik sıçan ve fareler 11 gibi nörodejeneratif modelleri servikal spinal kord ventral gri cevher içine NPC&#39;ler çok segmental, intraspinal nakli için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Sinir habercisi nakli, korunması ve / veya spinal kord yaralanması (SCI) ve motor nöron bozukluğu, amiyotrofik lateraller skleroz (ALS) kaybettim / işlevsiz servikal frenik motor nöronların yerini gelecek vaat eden bir strateji. Biz, ALS ve SKY kemirgen modellerinde servikal omurilik ventral boynuz hücre teslimat için bir protokol sağlar.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Frenik motor nöron kaybına bağlı solunum yetmezliği, insanlardaki travmatik omurilik yaralanmalarının (OY) büyük bir kısmının getirdiği yıpratıcı bir sonuçtur...

Bu prosedürün genel amacı, hem sıçanlarda hem de farelerde servikal omuriliğin ventral gri maddesine, çoklu ve segmental intraspinal nöral öncül hücre transplantasyonu gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle transplantasyon için hedeflenen nöral öncül hücre tipinin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, hücre transplantasyonunun planlandığı her noktada omuriliğe laminektomi uygulanır.Ardından, hücrelerin servikal spinal kordun ventral boynuzuna doğru şekilde iletilmesini sağlamak için uygun bölgelere ve derinliklere enjeksiyonları yapılır. Son adım, transplant edilen hücrelerin spinal kordda sağ kalımını sağlamak amacıyla, hayvan sakrifiye edilene kadar immünosüpresyon uygulamaya devam etmektir. Nihayetinde, transplantasyon sonrası çeşitli zaman noktalarında, yetişkin servikal spinal korddaki transplant edilen nöral öncül hücrelerin sağ kalımı, migrasyonu ve diferansiyasyonu; immünohistokimya ve ardından gelen mikroskopi analizi gibi histolojik yöntemler aracılığıyla takip edilerek sonuçlar elde edilebilir.Bu yöntemdeki görsel gösterim kritik öneme sahiptir; çünkü karmaşık spinal kord cerrahi işlemleri ve hücre transplantasyonu adımlarının çoğu, büyük bir dikkat ve özel teknikler gerektirdiğinden öğrenilmesi zordur ve bu gösterimler işlemleri kolaylaştırır. Önerilen bu prosedürler uygulandığında, transplantasyondan üç gün önce, hayvanı vücut ağırlığının kilogramı başına günlük 10 milligram siklosporin A'yı deri altına enjekte ederek immünosuprese edin. Eğer kemirgen türevli hücreler transplant edilecekse, vücut ağırlığının kilogramı başına bir milligram FK 5 0 6 ve rapamisin'i intraperitoneal enjeksiyon yoluyla uygulayın.İnsan kaynaklı hücreler nakledilecekse, ekartör oluşturmak için sağlam ataçlar şekillendirin. Bir kanca yapmak için ataçtan bir parçayı kırın ve ataçla diğer ucunu küçük bir halka şeklinde bükün. Ardından, her ekartörün halkasından bir ip bağlayın; ekartörleri ve cerrahide kullanılacak tüm aletleri cerrahi gününde otoklavlayın.Yazılı protokolde belirtilen prosedürlere uygun olarak glial progenitör hücrelerin veya nakledilecek diğer hücrelerin alikotlarını hazırlayın. Hücreler hasat edildikten sonra, hücre süspansiyonlarını birden fazla 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüpüne dağıtın ve ıslak buz üzerinde tutun. Ardından, hayvana uygun bir anestezi yöntemi uyguladıktan sonra, ayak parmak sıkıştırma testi yaparak cerrahi için uygun bir anestezi düzeyi elde edildiğini doğrulayın.Hayvanın sırtını tıraş etmek için elektrikli tıraş makinesi kullanarak, kulakların hafifçe rostralindeki bölgeden hayvanın sırtının ortasına kadar olan alanı iyice tıraş edin ve kılların insizyon bölgesine girmesini önlemek için kesilen kılları ciltten temizleyin. Ardından, bir gazlı bezi povidoned iyot antiseptik solüsyonu ile ıslatın ve tıraş edilmiş bölgedeki cilde uygulayın. Antiseptik solüsyon ile en az iki kez ve alkol veya seyreltilmiş dezenfektan ile dairesel hareketlerle iki kez ovun.İnsizyon bölgesinden başlayarak saç çizgisine doğru dışa doğru ilerleyin. Temiz bir cerrahi tahtanın üzerine steril rulo yapılmış bir gazlı bez yerleştirin ve bezin hareket etmemesi için onu tahtaya bantlayın. Hayvanı, rulo yapılmış gazlı bezin üzerine prune pozisyonunda yerleştirin.Hayvanın her iki kolunu ped üzerinde açın ve ardından servikal omuriliği desteklemek için kolları pede ve cerrahi tahtaya bantlayın. Servikal kord derinin yüzeyinin derinlerinde bulunduğu için bu işlem, cerrahi boyunca çalışmayı kolaylaştıracaktır. Gösterim amaçlı olarak videoda yer almasa da bu prosedür sırasında steril bir cerrahi örtü kullanılmalıdır.Öncelikle, en düşük büyütmeye ayarlanmış bir cerrahi mikroskop altında, kafatasının tabanından skapulaya kadar orta hat boyunca bir insizyon yapmak için keskin, steril bir skalpel kullanın. Ardından, omurga üzerindeki üç kas tabakası boyunca bir insizyon yapın. Tüm kas tabakalarını minimum sayıda kesiyle kesmek için yeterli basınç uygulayın, ancak derin dokularda hasara yol açabileceği için çok sert bastırmayın; bu işlem sırasında iki adet pamuk uçlu aplikatör kullanın.Üstteki kası paraspinal kastan ayırmak için döndürme hareketi uygulayın. Kanamaya neden olacağı için kası kesmeyin veya yırtmayın. Kası geri çekmek için ev yapımı dört adet rektrakörü uygun konuma yerleştirin.Ardından, dört ekartörün her birini dört köşeye doğru çekin ve ekartörleri sabitlemek için ipleri tahtaya bantlayın. Nihai maruziyet kare veya dikdörtgen şeklinde olmalıdır. Vertebraların dorsal yüzeyinden paraspinal kası uzaklaştırmak için fare dişli pens ve orta boy yaylı makas kullanın.Kemik yüzeyini daha iyi açığa çıkarmak için kesileri kemiğe çok yakın yapın. Kesilerin vertebraların yüzeyine paralel olduğundan emin olun, ancak korda doğru derin kesim yapmayın. Orta boy yaylı makası bir raw share ile değiştirin.Ardından, rat dişli pensle C2 çıkıntısı üzerindeki kası kavrayarak tüm omurga kolonunu sabitleyin ve C4, C5 ve C6 seviyelerindeki kasları uzaklaştırmak için küt makas kullanın. Sonra C5 seviyesinde laminektomiye başlayın. Bölgeyi tekrar, C2'yi rat dişli pensle tutarak sabitleyin.Lamina'nın tamamını kemik makasıyla kavrayın ve alet spinal kolon eksenine tamamen dik olacak şekilde konumlandırın. Spinal korda baskı uygulamadan lamina'yı yavaşça ve nazikçe kırın. Ardından, kırılan kemik parçasını nazikçe yukarı doğru çekin.Ardından, ham ger'i omurga ile dik açıda konumlandırın. Daha sonra, raw ger'i kord yüzeyine göre 30 ila 60 derecelik bir açıyla kemiğin altına nazikçe yerleştirin. Laminektomiyi C4 ile C6 arasındaki tüm lamin들에 genişletmek için küçük kesiler yapın.Kanamaya neden olacağı için laminektomiyi çok fazla lateral olarak genişletmeyin. Mikroskop büyütmesini yaklaşık 15 x seviyesine çıkarın ve spinal korda odaklanın. Düz ve keskin bir alet kullanın.Dura üzerindeki bağ dokusunu temizlemek için beş numara forseps kullanın. Ardından, durayı omurga eksenine paralel olacak şekilde kesmek için mini yaylı makas veya mikro bıçak kullanın. Dorsal kökçüklerin giriş bölgesinin hemen medialindeki bir noktada, duranın enjeksiyon için belirlenen bölgeden delindiğinden emin olun.Delme işleminden sonra, dura materden serebrospinal sıvı akacaktır; omurilik yüzeyini ve tüm açık alanı gazlı bez veya pamuk uçlu bir aplikatörle kurulayın. Omuriliği sıkıştırmadan veya yaralamadan, durayı tutmak ve omurilikten hafifçe kaldırmak için pens kullanın. 10 mikrolitrelik Hamilton gast tipi çıkarılabilir iğneli bir şırınga kullanarak insizyonu rostral kordal eksende hafifçe genişletin.Keskin, 33 gauge, 45 derece eğimli metal Hamilton iğnesi takılıdır. Tek bir enjeksiyon bölgesi için gerekli hacimdeki hücre süspansiyonunu yavaşça yükleyin. Mikroskop aracılığıyla ilerlemesini izleyerek, iğnenin ucunu omuriliğin dorsal yüzeyine doğru indirin.İstenen anatomik bölgeyi doğru şekilde hedeflemek için şırıngayı omurga ekseniyle hizalayın; iğneyi mümkün olduğunca 90 dereceye yakın ve dorsal kökçüklerin giriş bölgesinin hemen medialine yönlendirin. İğnenin ucuyla omuriliğin yüzeyine nazikçe dokunarak, iğne ucuyla omuriliği hafifçe bastırın. Ardından, omurilik normal konumuna dönene kadar iğneyi geri çekin.Mikromanipülatör üzerindeki cetveli kullanarak bu konumu Z eşittir 0.0 olarak kaydedin. Ardından, mikroskop aracılığıyla ilerlemeyi görsel olarak izlerken, iğneyi omuriliğe doğru hafifçe indirin. Yetişkin bir sıçanda ventral boynuzu hedeflemek için iğneyi 1.5 milimetre aşağıya indirin.Enjeksiyona başlamadan önce iğneyi iki ila beş dakika boyunca yerinde bırakın. Bu süre zarfında cerrahi düzeneğin bozulmadığından emin olun. Ardından, pompa kontrol cihazını kullanarak iki mikrolitre hücreyi, sabit bir hızda iki ila beş dakika boyunca enjekte edin; enjeksiyondan sonra iğneyi iki ila beş dakika daha yerinde bırakın.Ardından iğneyi omurilikten dikkatlice geri çekin. Enjeksiyon işlemini diğer hedef bölgeler için tekrarlayın. Tüm hedef bölgelere enjeksiyon yapıldıktan sonra, mikroskobu en düşük büyütme oranına getirin ve sütürleyin.Üstteki üç kas tabakasının tamamını, rostral kordal eksende üç noktadan 4-0 sütür kullanarak aynı anda kapatın. Cildi, zımbalar arasında yaklaşık 0,5 cm mesafe olacak şekilde dokuz milimetrelik yara klipsleri ile zımbalayın. Yaralar tamamen iyileşmeden önce hayvanın zımbaları koparmasını önlemek için zımbaları portegü ile sıkıştırın.İnsizyon yara bölgesine emdirilmiş gazlı bez ile povidone IRD antiseptik solüsyonu uygulayın ve hayvanın sirkülasyonlu sıcak su pedi üzerinde anesteziden ayılmasına izin verin. Sakrifis edilene kadar günlük siklosporin A veya FK 5 0 6 rapamisin enjeksiyonlarına devam edildi; 50, 000 fare ulaştı. Glio progenitor hücreleri, bir SOD one G 93 a sıçanın omurilik seviyesi C dört ventral boynuzuna nakledildi.Bu görüntü, iki pozitif farenin geldiğini, transplantasyon sonrası birinci ayda transplant edilen hücrelerin hayatta kaldığını ve hücrelerin ventral gri cevhere yerleştiğini, ancak enjeksiyon bölgesinin medialde kalarak noktalı çizgiyle belirtilen lateral ventral boynuzu ıskaladığını göstermektedir. Burada görüldüğü üzere, bu bölgeye çok daha yüksek sayıda hücre enjekte edilmesi, enjeksiyon bölgesinde ve iğne izi boyunca hasara yol açar. Uzmanlaşıldığında, bu teknik uygun şekilde uygulandığı takdirde altı enjeksiyon bölgesi için yaklaşık 45 ila 60 dakikada tamamlanabilir.

intraspinal-cell-transplantation-for-targeting-cervical-ventral-horn

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kurulan demiyelinizasyon ile farelerin omurilik içine fare sinir kök hücrelerinin (NSC'lerde) nakli ayrıntılı. NSC'lerde hazırlanması, torasik vertebra 9 (T9) ve NSC'lerde nakli laminektomi farelerde pre-ve post-operatif bakım birlikte özetlenmiştir.

Spinal Kordonlar nörotropik Mouse Hepatit Virüs ile Etkilenmiş Fare Fare Nöral Kök Hücre Transplantasyon Cerrahi

Kaynak: Zweckberger, K., et al. Deneysel Servikal Omurilik Yaralanmasında Nöral Öncü Hücrelerin ve Kendi Kendine Birleşen Peptitlerin Sinerjik Kullanımı.  J. Vis. Uzm. (2015).Bu protokol, bir sıçan modelinde omurilik yaralanması onarımı için hedefe yönelik bir enjeksiyon yaklaşımını göstermektedir. Destekleyici bir iskele oluşturmak için lezyon çekirdeğine kendiliğinden birleşen peptitlerin (SAP'ler) verilmesini ve ardından dokuyu yeniden şekillendirmek için lezyonun etrafına nöral öncü hücre...

Bir sıçan modelinde omurilik onarımı için kendi kendine birleşen peptitlerin ve nöral öncü hücrelerin enjekte edilmesi

Büyüme faktörlerini içeren fibrin matrisi tam omurilik kesisi sitelerine aşılı nöral kök hücrelerini korumak için kullanılmıştır. Aşılı hücreler tamamen lezyon boşluğu doldurdu ve uzun mesafelerde konak omuriliğe aksonlarını uzatıldı nöronlar da dahil olmak üzere birden fazla nöral hücre tipleri, ayrışmıştır.

Şiddetli Spinal Kord Yaralanması sonra fibrin ve Büyüme Faktörü kokteyller ile Nöral Kök Hücre Survival ve Farklılaşma Tanıtım

Servikal omurilik yaralanmasını hem kendi kendine birleşen peptitler (SAP) hem de nöral öncü hücreler (NPC) ile tedavi etmek, büyüme faktörleri ile birlikte, rejenerasyon ve iyileşmeyi teşvik etmek için umut verici bir yaklaşımdır. Kontüzyon/kompresyon anevrizması klip sıçan servikal SKY modeli ve SAP enjeksiyonu ve NPC transplantasyonunu içeren kombine tedavi oluşturuldu.

Deneysel Servikal Spinal Kord Yaralanmalarında Sinir Öncü Hücreler ve Öz-montaj Peptitler sinerjik Kullanımı

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Ciddi omurilik yaralanmaları sıklıkla doku defektlerine neden olur. Akut yaralanmadan sonra ve tam omurilik transeksiyonundan beş hafta sonra mekanik bir mikrokonektör sisteminin implantasyonu yoluyla sıçanlarda doku adaptasyonunu, rejeneratif yanıtları ve fonksiyonel iyileşmeyi teşvik etmek için bu tür boşlukları başarılı bir şekilde kapatmak için iki olasılık tanımlanmıştır.

Deneysel Stratejileri Akut ve Kronik Lezyon sonra Yaralı Omurilik Büyük Doku boşlukları doldurmak için

Bu makalenin tam transeksiyon sonra spinal kord kütükleri ve dolgu Schwann hücreleri (SCs) ve köprü ve akson rejenerasyon arasında boşluk teşvik için enjekte edilebilir membran matris ile arasında içi boş bir kanal eklemek için bir teknik anlatılmaktadır.

Nakli Schwann hücreleri kopuk sıçan Spinal Kord kütükleri arasında boşluk Axon rejenerasyon teşvik için köprü için PVDF-TrFE borular içinde

Bu yazıda, hücresel replasman tedavilerini test etmek için ex vivo bir model olarak nöral kök hücrelerle nakledilen uzun süreli omurilik organotipik dilimleri oluşturmak ve sürdürmek için tekrarlanabilir bir yöntem sunuyoruz.

Omurilik Yaralanmasında Hücre Transplantasyonunu Doğrulamak için Bir Platform Olarak Uzun Süreli Fare Omurilik Organotipik Dilim Kültürü

Bu çalışmada, omurilik yaralanması onarımı için adipoz kaynaklı kök hücrelerin pro-rejeneratif davranışını araştırmak ve bunlardan yararlanmak için kullanılabilecek sinir-mimetik kompozit hidrojeller geliştirilmiş ve karakterize edilmiştir.

Kök Hücre Dağıtımı Kullanılarak Omurilik Yaralanması için Kombinatoryal Terapötiklerin Geliştirilmesi

Mevcut protokol, tümör hücrelerinin intervertebral boşluğa enjekte edilmesiyle tekrarlanabilir bir murin spinal kord gliomu modelinin geliştirilmesini tanımlamakta ve araştırma ve terapötik geliştirme için daha etkili ve daha az invaziv bir yaklaşım sunmaktadır.

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Öğrenin, servikal ventral hornu hedefleyen intraspinal sinir öncüsü hücre transplantasyonu protokolünü. Fare ve sıçan modellerinde ALS ve spinal kord yaralanması için motor nöron koruma yöntemini keşfedin.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu (Video) | JoVE Journal

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Daha fazla video keşfet