İmmünkompetan Kemirgen Modellerinde Streptococcus pneumoniae'nin İntrabronşiyal Damlatılması

Metal bir iğneye bağlı polietilen borulu metal bir kanülden oluşan steril bir entübasyon cihazı edinin.

İğneye Streptococcus pneumoniae içeren bir şırınga takın ve hortumu doldurun.

Daha sonra, anestezi uygulanmış bir immünokompetan sıçanı sırtüstü pozisyonda konumlandırın.

Metal kanülün serbest ucunu farenin ağzına yerleştirin. Trakeaya sol bronşlara doğru ilerletin ve sol akciğerden uygun bir derinliğe kadar ilerletin.

Hortumu kanülün sonuna kadar ilerletin ve bakteriyel süspansiyonu sol akciğer lobuna aşılayın.

Bakteri kapsülü ve yüzeyle ilişkili enzimler, mukusta bakteri sıkışmasını önler. Ayrıca, Streptococcus pneumoniae, bronşiyal epitel hücreleri üzerindeki yüzey reseptörlerine yapışır, endositozu kolaylaştırır ve bazolateral yüzeye salınır.

Bakteriler, epitel hücrelerine ve bariyerlere zarar veren toksinler salgılar ve bir bağışıklık tepkisini tetikler.

Bununla birlikte, Streptococcus pneumoniae, konakçı bağışıklık tepkisinden kaçmak ve akciğer enfeksiyonu oluşturmak için stratejiler geliştirmiştir.

Çalışma yüzeyine, su banyosuna yakın temiz tek kullanımlık bir paspas yerleştirin.

Çalışma yüzeyini ve entübasyon cihazını hazırlamak için önce metal kanül ve polietilen boruyu metin protokolüne göre sterilize edin ve ardından cam saklama tüpünde çalışma yüzeyine aktarın. Ardından, saklama tüpünün kapağını çıkarın ve kanülün tutamak ucunu tüpün açık ucuna kaydırın. Steril forseps kullanarak, beherden bir uzunlukta polietilen boruyu çıkarın ve serbestçe hareket ettiğinden emin olarak steril metal kanülün içinden geçirin. Silinmez kalemle önceden belirlenmiş bir yere bir kılavuz işareti yerleştirin.

Ardından, steril tek kullanımlık 25 gauge bir iğneyi, iğneyi borunun içine birkaç milimetre kaydırarak polietilen borunun serbest ucuna yerleştirin. Ardından, tek kullanımlık 1 mililitrelik taze bir şırıngayı doldurmak için steril salin kullanın. Şırıngayı polietilen boruya takılan iğneye takın ve tüm salin hacmini borudan yıkayın.

Kullanılmış şırıngayı keskin alet kabına atın. Ardından, yeni bir steril tek kullanımlık 1 mililitrelik şırıngayı su banyosundan gelen agar bazlı inokül ile doldurun. 25 gauge iğneyi ve hortumu yeniden takın ve boru tamamen agar ile dolana kadar pistona bastırarak agarı borudan yıkayın.

Fareyi metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, hayvanı tek kullanımlık mat üzerine sırtüstü pozisyonda, başı sağa ve kuyruğu sola bakacak şekilde yerleştirin. Ardından, metal kanülün serbest ucunu hayvanın ağzına yerleştirin. Kanülü, serbest ucu yukarı doğru açılı olacak şekilde çevirin ve hafif bir bükülme hareketi ile gırtlak yapılarını dikkatlice atlayarak yavaşça trakeaya doğru ilerletin.

Trakeal halkaları palpe etmek için sol işaret parmağını kullanırken, kanülü birkaç kez hafifçe ileri ve geri kaydırarak yemek borusunun aksine trakeaya yerleştirmeyi onaylayın.

Yemek borusuna değil trakeaya entübasyonu sağlamak için kanülü hafifçe ileri geri hareket ettirin ve çıkıntıları hissedin. Kanül boğazdan aşağı düzgün bir şekilde kayarsa ve çıkıntılar hissedilemezse, cihazı çıkarın ve tekrar deneyin.

Kanül, trakeanın sol ve sağ bronşlara ayrıldığı çatallanmaya ulaştığında, kanülün sol bronşlara yerleştirildiğinden emin olmak için hayvanın sol tarafına doğru hafif bir bükülme hareketi yapın.

Yaygın bir hata, inokusun akciğere yeterince derine yerleştirilmemesidir, bu da hava yollarını tıkayabilir ve nefes almayı engelleyebilir. Bir kanül uygun açıya çevrildiğinde, sol bronşun içine kolayca kaymalı ve uygun derinliğe düzgün bir şekilde ilerlemelidir.

Uygun derinliğe ulaşıldığını doğrulamak için önceden yerleştirilmiş kılavuz işaretini kullanarak, metal kanülü sol akciğerin yarısına kadar 3/4 yaşına gelene kadar ilerletin. Metal kanül yerindeyken, metal kanülün ucundan çıkacak ve akciğeri delmeyecek kadar ilerletildiğinden emin olmak için boru üzerine önceden yerleştirilmiş kılavuz işaretini kullanarak polietilen boruyu birkaç milimetre ilerletin.

Her iki kanül de yerindeyken, sol akciğerin büyük lobunun derinliklerine 100 mikrolitre agar süspansiyonu aşılamak için ekli şırıngayı kullanın. Borunun birkaç milimetresini geri çekin ve sağlam entübasyon cihazını yavaşça çıkarın. Tekrar cam saklama tüpüne koyun ve iyileşmesi için hayvanı yeni bir kafese koyun.