JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 3:03 dk • August 20th, 2025
Daha önce lakrimal bez kaynaklı otoantijenler ve yabancı antijenler içeren bir antijen adjuvan emülsiyonu ile aşılanmış bir sıçan alın.
Emülsiyonu yeniden enjekte edin ve intraperitoneal olarak boğmaca toksini enjekte ederek maksimum T hücresi aktivasyonunu sağlayın.
Aktive edilmiş hücreler, dolaşımdaki efektör bellek T hücrelerine, TEM'lere ve dokuda yerleşik bellek T hücrelerine, TRM'lere farklılaşır. TRM'lerin bir yüzdesi oküler yüzey dokularında bulunur.
Belirli bir aralıktan sonra, antijenleri forniceal sub-konjonktiva ve lakrimal bezlere enjekte ederek lokalize inflamasyonu indükleyin.
Subkonjonktival antijen sunan hücreler, APC'ler, antijenleri TRM'lere sunarak sitokin salınımını tetikler.
Sitokinler, konjonktival epitel hücrelerini, TEM'leri işe alan kemokinleri serbest bırakmaya indükler.
APC'ler sızan TEM'leri yeniden aktive ederek proinflamatuar sitokin salınımını tetikler.
Sitokinler, müsin üreten konjonktival goblet hücrelerinin ölümüne neden olarak müsin seviyelerini düşürür ve gözyaşı filmi instabilitesine neden olur.
Sitokinler lakrimal bez hücre ölümünü indükler - gözyaşı üretimini azaltır - ve kornea epitel hücrelerini matriks metaloproteinazlar üretmesi için uyararak korneaya zarar verir.
Sıçanı, başarılı kuru göz indüksiyonunu gösteren klinik özellikler açısından değerlendirin.
Sıfırıncı günde, 1 miligram lakrimal bez özütü ve 200 mikrogram ovalbümin içeren 200 mikrolitre emülsiyonu dağıtın ve Freund'un adjuvanını 1 mililitrelik Luer-lock şırıngalara tamamlayın ve şırıngaları 27 gauge iğnelerle donatın.
Anestezi kullanmadan, emülsiyonu sıçan kuyruklarının tabanına deri altına enjekte edin. Daha sonra, 14. günde benzer şekilde, aynı antijenden 200 mikrolitre enjekte edin ve eksik Freund Adjuvanını enjekte edin. Aynı gün, intraperitoneal olarak 100 mikrolitre PBS'ye 300 nanogram boğmaca toksini enjekte edin.
48. günde, gerekli miktarda ovalbümini tartın ve PBS'de çözün, daha sonra ovalbümini bu videoda daha önce hazırlanan çözülmüş lakrimal bez özü ile birleştirin ve mililitre ovalbümin başına 1 miligram ve mililitre başına 1 miligram gözyaşı bezi ekstresi içeren antijen çözeltisi yapın.
Sıçanları uyuşturduktan sonra, gözün fornisiyal subkonjuktivasına 5 mikrolitre antijen enjekte edin, ardından lakrimal beze 20 mikrolitre antijen enjekte edin.