JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:36 dk. • July 8th, 2025
Efferositoz, fagositik hücrelerin apoptotik hücreleri temizlediği süreçtir.
Efferositozu analiz etmek için apoptoza duyarlı fare timositleri elde edin. Hücre geçirgen CFSE boyası ile inkübe edin.
Hücre içi esterazlar, CFSE'yi hücre geçirimsiz floresan boyaya bölerek timositleri boyar. Aşırı lekelenmeyi önlemek için ısıyla etkisiz hale getirilmiş serum ekleyin.
Lekeli timositleri bir kültür plakası üzerine koyun. Kritik hücresel sinyal kaskadını bozan ve apoptozu indükleyen bir protein kinaz inhibitörü olan staurosporin ekleyin. Ayrıca, fosfatidilserin kalıntıları, hücre zarının dış broşürüne yer değiştirerek "beni ye sinyalleri" olarak işlev görür.
Spesifik reseptör tirozin kinazları eksprese eden aktive edilmiş fare peritoneal makrofajları içeren çok kuyulu plaka kuyucuklarına artan apoptotik timosit konsantrasyonları ekleyin.
Bu kinazlar, açığa çıkan fosfatidilserini apoptotik timositler üzerine bağlayarak makrofajlar tarafından içselleştirilmelerini kolaylaştırır.
Kuluçka sonrası, serbest yüzen apoptotik timositleri çıkarın. Makrofaj CD11b moleküllerine bağlanan florofor etiketli anti-CD11b antikorları ekleyin.
Bir floresan mikroskobu kullanarak, efferositozu gösteren farklı flo
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin