Makrofaj hücre dışı tuzakların in vitro stimülasyonu ve görselleştirilmesi

Yapışık bir makrofaj kültürü ile başlayın.

Proinflamatuar sitokinler ekleyin.

Sitokin, makrofaj yüzey reseptörlerine bağlanarak bir dizi enflamatuar olayı başlatır.

İlk olarak, sitokin sinyali antimikrobiyal peptitlerin üretimini tetikler.

Eşzamanlı olarak, makrofaj çekirdeği içindeki kromatin deyoğunlaşmaya uğrar.

Bu işlem, zar bileşimindeki değişikliklerle birleştiğinde, nükleer zarı bozar ve yoğunlaşmamış kromatini sitoplazmaya salar.

Sitoplazmada, antimikrobiyal peptit salınan kromatin ile etkileşime girer.

Sitokin sinyal aracılı hücre zarı geçirgenliği, yoğunlaştırılmış kromatinin hücre dışı boşluğa salınmasına ve bir Makrofaj Hücre Dışı Tuzak veya MET oluşturmasına neden olur.

Bu ağ benzeri yapılar DNA, histonlar, antimikrobiyal moleküller ve enzimlerden oluşur.

Hücre dışı tuzaklarda açıkta kalan DNA'ya seçici olarak bağlanan bir floresan nükleik asit boyası olan SYTOX green'i ekleyin.

Bir floresan mikroskobu altında, MET, uyarılmış makrofajdan salınan hücre dışı DNA'nın yeşil çizgileri olarak görünür.

Steril koşullar altında, MET salınımının farklı uyarıcılarını içeren kültür ortamını tam RPMI 1640 ortamına hazırlayın. Hipokloröz asit stimülasyonu ile ilgili deneyler için, 3