PMN'lerde Bakteriyel Hücre Dışı Protein Aracılı Sitotoksisite için Bir Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:14 dk. • July 8th, 2025
Monomerik S ve F bileşenlerinden oluşan gözenek oluşturan bir toksin olan lökosidin salgılayan patojenik bir bakteri olan Staphylococcus aureus kültürünü alın.
Hücreleri peletleyin ve süpernatanı seri olarak seyreltin. Lökosidin içeren süpernatanı, polimorfonükleer lökositlere veya PMN'lere sahip bir mikroplakaya aktarın ve inkübe edin.
S bileşeni, PMN'ler üzerindeki spesifik transmembran reseptörlerine bağlanır, ardından hücre zarına yerleştirmek için F bileşeni ile hetero-oligomerizasyon gerçekleşir ve bu da gözenek oluşumuna neden olur.
Gözenek, hücre içi potasyum iyonlarında azalmaya neden olarak NLR ailesi pyrin domain içeren 3 veya NLRP3 proteinini aktive eder.
NLRP3, bir kaspaz alım alanı içeren apoptozla ilişkili benek benzeri proteine veya pro-kaspaz-1'i işe alan ve bir inflamatuar oluşturan ASC'ye bağlanır.
Otomatik proteoliz, pro-kaspaz-1'i aktif kaspaz-1'e dönüştürerek hücre ölümünü tetikler.
Hücreleri belirli aralıklarla hasat edin. DNA'yı bağlamak için ölü hücrelere hasarlı zarlardan giren ve floresan yayan propidyum iyodür veya PI ekleyin.
Akış sitometrisi kullanarak, hem lökosidin konsantrasyonunun hem de inkübasyon süresinin sitotoksik etkisini değerlendirmek için
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin