JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:35 dk. • July 8th, 2025
Öldürücü ve daha az öldürücü Staphylococcus aureus suşlarını alın.
Bakterileri opsonize etmek için serum ekleyin.
Artan bakteri konsantrasyonlarını nötrofiller içeren soğutulmuş çok kuyulu plaka kuyucuklarına aktarın. Düşük sıcaklıklar nötrofil aktivasyonunu önler.
Senkronize fagositozu kolaylaştırmak için santrifüj.
Nötrofil reseptörleri opsoninleri bağlayarak fagozomlara bakteri içselleştirmesini tetikler.
Virulan bakterilerde, fagozomal ortam sitolitik toksinlerin ekspresyonunu tetikler.
Bu toksinler gözenekler oluşturarak fagozomları bozar ve nötrofil zar bütünlüğünü tehlikeye atar.
Bununla birlikte, daha az öldürücü bakteriler, azalmış sitolitik toksin ekspresyonu sergiler.
İnkübasyon sonrası, nötrofilleri ayırın ve bunları floresan propidyum iyodür (PI) boyası içeren akış sitometresi tüplerine aktarın.
Boya, nötrofillere bozulmuş zarlarla girer ve DNA'yı boyar.
Bir akış sitometresi kullanarak, PI boyaması için nötrofilleri analiz edin.
Virülan suşun fagositozunu takiben PI pozitif nötrofillerin oranında, daha az virülan suşla karşılaştırıldığında, konsantrasyona bağlı bir artış, virülan suşun nötrofillere karşı sitotoksisitesini gösterir.
Alt kültürlenmiş Staph aureus orta üs
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin