JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:13 dk. • July 8th, 2025
Yapışmış epitel hücreleri içeren çok kuyucuklu bir plaka alın ve yeşil floresan protein etiketli Coxiella mutantları ile tedavi edin; bazıları tip IV salgı sistemi geninde veya T4SS geninde mutasyonlara sahiptir - replikasyon için çok önemlidir.
Replikatif mutantlar epitel hücreleri ile etkileşime girerek Coxiella yutulmasını tetikler, Coxiella içeren vakuol veya CCV oluşturur ve lizozomla ilişkili membran glikoprotein-1 veya LAMP1'i CCV'ye alır.
Bu, efektör proteinlerin tip IV salgılama sistemi yoluyla hücre sitoplazmasına salgılanmasını kolaylaştırır ve bakteri replikasyonunu teşvik eder.
T4SS gen mutasyonlarına sahip mutantlar replikasyon olmadan kalır.
İnkübasyon sonrası, hücreleri bir floresan boya ile boyayın, sabitleyin ve hücre zarını geçirgen hale getirin.
CCV üzerindeki LAMP1 proteinleri ile etkileşime giren LAMP1'e özgü primer antikorları tanıtın.
Kırmızı florofor etiketli ikincil antikorlarla kaplayın, birincil antikorlarla etkileşime girerken, Hoechst boyası hücrelerin çekirdeklerini boyar.
Bir epifloresan mikroskobu altında, çekirdeğe yakın daha az yeşil Coxiella içeren kırmızı floresan vakuoller, Coxiella mutantlarının kusurlu replikasyonunu gösterir.
Bununla birlikt
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin