JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:19 dk. • July 8th, 2025
Aktif olarak büyüyen Porphyromonas gingivalis, anaerobik patojenik bakterilerin süspansiyonu ile başlayın.
Floresan olmayan, hücre geçirgen bir boya olan BCECF-'yi ekleyin.
Aktif sitoplazmik esterazlar, boyayı floresan, hücre geçirimsiz bir forma hidrolize ederek bakterileri boyar.
merkezkaç. Bakterileri anaerobik ortamda yeniden süspanse edin.
Etiketli bakterileri, yapışmış insan endotel hücreleri ile lameller içeren çok kuyulu plaka kuyucuklarına ekleyin.
Anaerobik bir odada inkübe edin.
Bakteriyel fimbriyalar, endotel hücre yüzeyi reseptörlerine bağlanarak hücre içi sinyal kaskadlarını başlatır.
Bu, fagozomlar içinde aktinin yeniden düzenlenmesine ve bakteriyel içselleşmesine yol açar.
İnkübasyon sonrası, içselleştirilmemiş bakterileri uzaklaştırmak için lamelleri tamponla yıkayın.
Hücresel yapıları korumak için hücreleri paraformaldehit ile sabitleyin. Hücre içi hedeflere erişmek için hücreleri iyonik olmayan bir deterjanla geçirgenleştirin.
Aktin filamentlerine bağlanan floresan etiketli falloidin ekleyin.
Lameli DNA'yı lekeleyen DAPI içeren bir montaj ortamının üzerine yerleştirin.
Floresan aktin ile endotel hücreleri içindeki floresan Porphyromonas gingivalis'i gözlemleyin v
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin