JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:18 dk. • July 8th, 2025
Spesifik yüzey belirteçleri ile ayırt edilen yapışık M1 ve M2 makrofaj alt popülasyonları ile başlayın. Bu hücreler floresan işaretli Mycobacterium tuberculosis ile enfekte olur.
Kültür kuyucuklarına FACS tamponu ekleyin.
Tampondaki EDTA, hücrenin kültür kuyucuklarından ayrılmasını sağlar.
Hücre süspansiyonunu mikrosantrifüj tüplerine aktarın.
Tüpleri santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Hücreleri, florokrom konjuge bir anti-makrofaj antikor kokteyli ve canlılık boyası olan Zombie-UV'de yeniden süspanse edin.
Zombi-UV floresan boyası, hasarlı zarlardan ölü hücrelere girer ve sitoplazmik proteinlere bağlanarak, canlı boyanmamış hücrelerden net bir farklılaşma sağlar.
Ayrıca, floresan konjuge anti-makrofaj antikorları, makrofajlar üzerindeki hedef antijenlere bağlanarak alt popülasyonların diferansiyel tespitini sağlar.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için hücreleri yıkayın. Merkezkaç. Süpernatanı çıkarın.
Proteinleri çapraz bağlamak, hücre morfolojisini korumak ve analiz sırasında güvenli kullanım için Mikobakterileri etkisiz hale getirmek için hücreleri fiksatif bir tamponda yeniden süspanse edin.
Son olarak, akış sitometrisi için numuneleri santrifüjleyin ve işleyin.
Mycobacterium i
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin