JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:25 dk. • July 8th, 2025
Kanser mikroçevresinde, aktive edilmiş nötrofiller, kanserin ilerlemesinde çok önemli bir rol oynayan hücre dışı DNA lifleri, histonlar ve granüler proteinlerden oluşan nötrofil hücre dışı tuzakları veya NET'leri serbest bırakır.
Kanser hücresi-NET yapışmasını in vitro olarak incelemek için, çok kuyulu plaka kuyucuklarına NET süspansiyonu ekleyin. NET tek tabaka oluşumu için inkübe edin.
Kuluçka sonrası, yapışmamış NET'leri çıkarın.
Kuyucuklardaki serbest bağlanma bölgelerini bloke etmek için bir protein çözeltisi ekleyin.
Floresan etiketli kanser hücrelerini NET tek katmanları üzerine pipetleyin.
Kanser hücreleri üzerindeki spesifik yüzey reseptörleri NET'lerle etkileşime girerek hücre yapışmasını kolaylaştırır.
İnkübasyon sonrası, medyayı negatif kontrol kuyusundan atın.
NET'leri parçalamak için deoksiribonükleaz ekleyin ve hücreleri ayırın.
Negatif kontrol ve test kuyularından çözeltileri çıkarın. Yapışmayan hücreleri çıkarmak için tampon kullanın.
Yapışık kanser hücrelerini formaldehit ile NET'lere sabitleyin.
Bir floresan mikroskobu kullanarak, NET'lere yapışan floresan kanser hücrelerini görselleştirin.
Test kuyuları, NET'lere önemli kanser hücresi yapışması gösterirken, deok
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin