Bakteriyel Hücre Boyaması ve İmmünolojik Çalışmalara Hazırlık

Üstel fazda bir bakteri kültürü içeren bir tüp ile başlayın, tutarlı sonuçlar için tek tip ve aktif olarak büyüyen bakteriler sağlayın.

Hücreleri toplamak için santrifüjleyin; enkaz içeren süpernatanı aspire edin ve hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücre geçirgen bir kırmızı floresan boya ekleyin. Boya molekülleri bakteri hücre zarına nüfuz eder ve nükleoide ulaşır, DNA ile bağlanır ve bakterilere kırmızı floresan verir.

Lekeli bakterileri peletlemek için santrifüjleyin ve bağlanmamış boya içeren süpernatanı aspire edin.

Hücre canlılığını korumak için bakterileri bir büyüme ortamına yeniden süspanse edin.

Bir fotometre kullanarak, seyreltilmiş bakteri süspansiyonunun emilimini 600 nanometrede ölçün.

Bakteri konsantrasyonunu belirlemek için absorbans değerini standart bir eğri ile karşılaştırın.

İstenilen lekeli bakteri süspansiyonu hacmini, bir büyüme ortamı içeren taze bir tüpe aktarın. Bu, enfeksiyonun çokluğunu veya MOI'yi temsil eden konak hücre enfeksiyonu için istenen bakteri konsantrasyonunu elde etmek içindir.

İstenilen MOI'ye sahip boyanmış bakteriler immünolojik çalışmalar için hazırdır.

İlk olarak, bakteri kültürlerini oda sıcaklığında iki dakika boyunca 13.000 kez g'de